大鼠環(huán)氧化酶2(COX-2)酶聯(lián)免疫

 檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書        AE99202Ra

   使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來(lái)檢測(cè)大鼠環(huán)氧化酶2(COX-2)，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

用   途：用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中環(huán)氧化酶2(COX-2)測(cè)定。

工作原理:

   本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定樣品中大鼠環(huán)氧化酶2(COX-2)水平。向預(yù)先包被了大鼠環(huán)氧化酶2(COX-2)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠環(huán)氧化酶2(COX-2)，溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗環(huán)氧化酶2(COX-2)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠環(huán)氧化酶2(COX-2)的濃度呈正相關(guān)。

 

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說(shuō)明書

1份

1份

 

封板膜

2片（48）

2片（96）

 

密封袋

1個(gè)

1個(gè)

 

酶標(biāo)包被板

1 48

1 96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品160ng/L

0.5ml 1瓶

0.5ml 1瓶

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

鏈霉親和素-HRP

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

生物素標(biāo)記的抗COX-2抗體

0.5ml 1瓶

1 ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

終止液

3ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

濃縮洗滌液

（20ml 20倍） 1瓶

（20ml 30倍） 1瓶

2-8℃保存

 

需要而未提供的試劑和器材

 

37℃恒溫箱。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。精密移液器及一次性吸頭蒸餾水，一次性試管吸水紙

 

注意事項(xiàng)

 

從2-8℃取出的試劑盒，在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

 

洗板方法

 

手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。

 

自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中

 

標(biāo)本要求 

1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

 

操作程序

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)

80 ng/L

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120 l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120 l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40 ng/L

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120 l的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120 l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20 ng/L

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120 l的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120 l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 ng/L

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120 l的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120 l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5ng/L

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120 l的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120 l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。加樣：1）空白孔，空白對(duì)照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗COX-2抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A B和終止液，其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；3）待測(cè)樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗COX-2抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50 l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 終止：每孔加終止液50 l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。

 

操作程序總結(jié)：

 

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。

2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%

 

檢測(cè)范圍：

檢測(cè)范圍：2ng/L - 80ng/L

 

保存條件及有效期：

保存：2-8℃。

有效期：6個(gè)月(2-8℃)。

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