BioGrammatics 糖基化畢赤酵母表達(dá)體系

Pichia酵母菌屬的巴斯德畢赤酵母是當(dāng)今常用的單細(xì)胞真核表達(dá)體系，是載體構(gòu)建、表達(dá)、發(fā)酵和純化重組蛋白和肽的優(yōu)良體系。BioGrammatics在畢赤酵母的生命科學(xué)研究利用領(lǐng)域有著悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)與Research Corporation Technologies（RCT）合作開(kāi)發(fā)出GlycoSwitch 技術(shù)，利用該技術(shù)可以在畢赤酵母中表達(dá)的蛋白加以改性糖基化修飾。糖基化可影響蛋白質(zhì)折疊，穩(wěn)定性和蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用，因此利用GlycoSwitch 技術(shù)可設(shè)計(jì)具有更多 人類(lèi) 糖基化特征的蛋白質(zhì)，用以研發(fā)適用于人類(lèi)的的生物藥物，以及改良常規(guī)重組蛋白質(zhì)。目前BioGrammatics可提供的基于畢赤酵母的產(chǎn)品包括快速簡(jiǎn)單的蛋白質(zhì)表達(dá)、分子表達(dá)工具下的菌株設(shè)計(jì)（如強(qiáng)大的嚴(yán)格調(diào)控的啟動(dòng)子，的分泌基因組操作）、大規(guī)模高細(xì)胞密度酵母發(fā)酵（ 700 g / l wcw，200k升）、特定的酵母發(fā)酵條件設(shè)計(jì)、真核蛋白質(zhì)加工（折疊，分泌，糖基化）及酵母遺傳學(xué)分析等服務(wù)。

SuperMan5 (his )

Description:

GlycoSwitch  strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (histidine auxotroph)

描述：

GlycoSwitch  應(yīng)變，曼5 N-連接的寡糖的結(jié)構(gòu)（組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型）

SuperMan5（his-），Och1-破壞與pGAP-甘露糖苷酶表達(dá)盒，殺稻瘟素抗性）。GS115（his4-），來(lái)自里氏木霉的 1,2-甘露糖苷酶，由具有殺稻瘟素抗性基因的質(zhì)粒上的GAP啟動(dòng)子調(diào)節(jié)，破壞SuperMan5基因組中的Och1基因。

Catalog Number

Description

Units

Price

PS005-01

Pichia pastoris strain as YPD agar culture stab

1 stab

$400.00

PS005-02

Pichia pastoris strain as electrocompetent cells

5 transformations

$350.00

BioGrammatics公司產(chǎn)品：

一、畢赤酵母表達(dá)載體

重組蛋白在畢赤酵母中的表達(dá)常見(jiàn)于表達(dá)載體整合到畢赤酵母基因組中，基因組整合導(dǎo)致目的基因在畢赤酵母中穩(wěn)定表達(dá)。通過(guò)大規(guī)模的表達(dá)菌株發(fā)酵可生產(chǎn)大量的目的蛋白質(zhì)?；谀康牡鞍缀突虻淖陨硖禺愋?，在載體設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮以下因素：1）胞內(nèi)表達(dá)或者分泌表達(dá)；2）適宜的啟動(dòng)子（誘導(dǎo)型，組成型，強(qiáng)，弱）；3）選擇標(biāo)記；4）特定基因/ （開(kāi)放閱讀框）ORF序列；5）表達(dá)盒在畢赤酵母基因組中適的位置。

BioGrammatics在畢赤酵母表達(dá)載體研究領(lǐng)域擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)，創(chuàng)建并測(cè)試了大量的表達(dá)載體，以?xún)?yōu)化數(shù)百種基因的表達(dá)和用于特定的應(yīng)用，包括細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外表達(dá)，膜蛋白的表達(dá)，高水平蛋白質(zhì)生產(chǎn)以及蛋白質(zhì)在代謝途徑中的表達(dá)和支持重組蛋白質(zhì)產(chǎn)物宜加工程度的蛋白質(zhì)。

BioGrammatics采用的pJ載體（pJ vectors, Jeannies vectors)是4-5kb的質(zhì)粒，帶有氨芐青霉素篩選基因和 無(wú)縫 克隆方案?？寺》桨富谠谄渥R(shí)別序列之外切割的IIS型限制酶，因此，可在終表達(dá)載體中去除限制酶結(jié)合位點(diǎn)，并且可以在不多加入不需要的密碼子的情況下加入ORF。

Product

Description

pJAN-s1

extracellular expression vector, S. cerevisiae  mating factor leader,

nourseothricin selection

pJAZ-s1

extracellular expression vector, S. cerevisiae  mating factor leader,

 zeocin selection

pJAG-s1

extracellular expression vector, S. cerevisiae  mating factor leader,

 G418 selection

pJAN

intracellular expression vector, nourseothricin selection

pJAZ

intracellular expression vector, zeocin selection

pJAG

intracellular expression vector, G418 selection

二、畢赤酵母表達(dá)菌株

BioGrammatics提供BG和GlycoSwitch 菌株兩種畢赤酵母表達(dá)菌株系列。其中BG菌株來(lái)源于野生巴斯德畢赤酵母菌株，初于1940年由加利福尼亞的Herman Phaff分離。我們使用Illumina HiSeq技術(shù)對(duì)Phaff菌株進(jìn)行單菌落分離，成為BioGrammatics起始的原始菌株BG08，BG08在經(jīng)過(guò)改良以消除細(xì)胞質(zhì)殺傷質(zhì)粒的能力產(chǎn)生野生型表達(dá)菌株BG10。此后除了BG09之外，BG系列中的所有后續(xù)菌株均通過(guò)的BG10基因組操作衍生而來(lái)。 而B(niǎo)G09是BG08的一個(gè)特定變體，已開(kāi)發(fā)用于在特定的胰蛋白酶切割位點(diǎn)標(biāo)記13C同位素后進(jìn)行質(zhì)譜分析。

除BG系列外，BioGrammatics還是RCT的GlycoSwitch 菌株經(jīng)銷(xiāo)商。 GlycoSwitch 菌株系列源于20世紀(jì)70年代的巴斯德畢赤酵母GS115菌株，是Phaff菌株的突變分離株之一，選擇用于組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)。初的GlycoSwitch Man5菌株來(lái)源于比利時(shí)根特大學(xué)和法蘭德斯生物技術(shù)研究所（VIB）的Roland Contreras博士，Nico Callewaert博士及其同事的合作分離。 SuperMan5菌株是由BioGrammatics研發(fā)的GlycoSwitch Man5的后續(xù)修飾菌株，其突變體och1基因座的所有同源性區(qū)域基因已被去除以防止其通過(guò)同源重組而逆轉(zhuǎn)為野生型。

Product

Description

Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+)

GlycoSwitch  strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures

Pichia pastoris SuperMan5 strain (his )

GlycoSwitch  strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (histidine auxotroph)

Pichia pastoris BG10 strain

Wild type Pichia pastoris expression strain (killer plasmid free)

Pichia pastoris BG11 strain

Derivative of Pichia pastoris BG10 strain, aox1 , MutS (methanol utilization slow)

Pichia pastoris BG09 strain

Derivative of Pichia pastoris BG08 strain, arg4 ::nourseothricinR, lys2 ::hygromycinR(arginine, lysine auxotroph)

Pichia pastoris BG12 strain

Derivative of Pichia pastoris BG10 strain, his4  (histidine auxotroph)

Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+, pep4 )

GlycoSwitch  strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (PEP4 protease deletion)

三、具有修飾糖基化的畢赤酵母菌株 - GlycoSwitch 技術(shù)。

GlycoSwitch系列菌株是與BioGrammatics與Research Corporation Technologies（RCT）合作，提供個(gè)可進(jìn)行糖基化修飾的畢赤酵母表達(dá)載體。糖基化可影響蛋白質(zhì)折疊，穩(wěn)定性和蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用，因可用于設(shè)計(jì)生成具有更多 人類(lèi) 糖基化的蛋白質(zhì)和生物制藥，以及改良其他類(lèi)別的重組蛋白質(zhì)。其核心GlycoSwitch 菌株具有中心聚糖加工酶（OCH1），可阻止聚糖延伸，并表達(dá)外源甘露糖苷酶以將現(xiàn)有聚糖修剪成更均勻的Man5結(jié)構(gòu)。此外，BioGrammatics還可提供基于GlycoSwitch 技術(shù)的定制化研發(fā)合同服務(wù)，使用BioGrammatics公司的豐富的Pichia專(zhuān)業(yè)技術(shù)為客戶(hù)提供特定應(yīng)用的量身定制糖蛋白。

Product

Description

Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+)

GlycoSwitch  strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures

Pichia pastoris SuperMan5 strain (his )

GlycoSwitch  strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (histidine auxotroph)

GlycoSwitch expression Vector Kit

pGlycoSwitch GnT I HIS

Histidine selection vector for expression of GlcNAc transferase I activity in Pichia pastoris

pGlycoSwitch ManII/1

G418 selection vector for expression of Mannosidase II activity in Pichia pastoris

pGlycoSwitch GnT II

Hygromycin selection vector for expression of GlcNAc transferase II activity in Pichia pastoris

pGlycoSwitch GalT/1

Nourseothricin selection vector for expression of Gal transferase I activity in Pichia pastoris

Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+, pep4 )

GlycoSwitch  strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (PEP4 protease deletion)

pGlycoSwitch GnT I

Zeocin selection vector for expression of GlcNAc transferase I activity in Pichia pastoris

四、畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)專(zhuān)用培養(yǎng)基

該系列產(chǎn)品專(zhuān)用于畢赤酵母表發(fā)體系發(fā)酵培養(yǎng)或擴(kuò)增，包括干粉和濃縮液，用于配制100ml和2.5L的培養(yǎng)液。

貨號(hào)

類(lèi) 型

規(guī) 格

PD001-100

1 g/ml stock solution, prepares 2.5 liters of YPD-nourseothricin plates

100 mg

PM001-100

pouch of powdered medium, prepares 100 ml

1 pouch

PM001-500

pouch of powdered medium, prepares 500 ml

1 pouch

上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購(gòu)服務(wù)商

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