廣州輝駿生物科技有限公司，成立于2008年，位于廣州市科學(xué)城，是一家由在生物醫(yī)藥領(lǐng)域具有資深科研資歷人才組建的創(chuàng)新型科技企業(yè)，致力于為生物醫(yī)藥企業(yè)、高校、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及個(gè)人提供高品質(zhì)的技術(shù)服務(wù)。通過(guò)近十年的發(fā)展，公司擁有完善的分子生物，細(xì)胞生物，蛋白免疫，質(zhì)譜分析平臺(tái)，尤其擅長(zhǎng)于蛋白質(zhì)組學(xué)與代謝組學(xué)，蛋白-蛋白，蛋白-核酸及核酸-核酸相互作用的篩選和驗(yàn)證，及以此為基礎(chǔ)的整體課題服務(wù)。公司提供的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)已在40余篇SCI文章中發(fā)表，其中蛋白質(zhì)組學(xué)權(quán)威期刊10余篇。

輝駿生物通過(guò)8年多精益求精的優(yōu)質(zhì)服務(wù)，我們已經(jīng)與中山大學(xué)、浙江大學(xué)、武漢大學(xué)、上海海洋大學(xué)、西南大學(xué)、廈門大學(xué)、廣州腫瘤醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院、華南植物研究所等全國(guó)100多家大中型科研院所建立廣泛密切的項(xiàng)目合作，不斷為他們提供優(yōu)質(zhì)的各類實(shí)驗(yàn)科研技術(shù)服務(wù)。

輝駿生物以扎實(shí)的科學(xué)為基礎(chǔ)， 以引領(lǐng)性的技術(shù)為支撐，以開創(chuàng)性的精神為動(dòng)力，為您提供整體實(shí)驗(yàn)解決方案！

輝駿生物慢病毒感染預(yù)實(shí)驗(yàn)：
慢病毒顆粒對(duì)不同細(xì)胞系的親嗜性不一，原代細(xì)胞或者難感染的細(xì)胞通常需要較高的MOI，因此建議首先用慢病毒對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行預(yù)感染，設(shè)定不同的MOI梯度(1、10、100等)，以評(píng)估目的細(xì)胞的MOI。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：

一塊96孔板，最大量程為10 L和100 L的移液槍各一支，小、中槍頭各一盒，1.5mL EP管若干個(gè)，polybrene、FItransfer和完全培養(yǎng)基。

A. 貼壁細(xì)胞的感染：
(1)培養(yǎng)細(xì)胞使其處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)；在實(shí)驗(yàn)前一天，將0.3 104~1.0 104個(gè)細(xì)胞接種至96孔板內(nèi)，每孔100 L培養(yǎng)基。
(2)待細(xì)胞匯合度為20%~50%之間時(shí)，可以使用慢病毒進(jìn)行感染。
(3)預(yù)實(shí)驗(yàn)可設(shè)置3組，分別為：完全培養(yǎng)基組、完全培養(yǎng)基+polybrene組、FItransfer組；polybrene的使用量為 5-10 g/mL之間，F(xiàn)Itransfer為輝駿生物開發(fā)的優(yōu)化過(guò)的助感染培養(yǎng)基，可直接當(dāng)作感染完全培養(yǎng)基，無(wú)需額外添加其他助感染試劑，具有增強(qiáng)感染效率的作用；每組設(shè)置3個(gè)不同的MOI值，以尋找慢病毒感染的最適條件。
(4)病毒稀釋：實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備2個(gè)1.5 mL的無(wú)菌EP管，將冰浴解凍的1 108的病毒液分別稀釋為10倍、100倍，具體操作步驟為：取10 L 1 108 TU/mL的病毒液加入90 L完全培養(yǎng)基中，則此時(shí)病毒液的滴度為1 107 TU/mL，病毒量為106TU；再?gòu)拇巳芤褐形?0 L病毒液加入90 L完全培養(yǎng)基中，此時(shí)病毒液的滴度為1 106 TU/mL，病毒量為105TU。吸取病毒液的過(guò)程中盡量避免產(chǎn)生泡沫。
(5)polybrene稀釋：polybrene的使用量為每孔5 g/mL，可預(yù)先加入完全培養(yǎng)基中。

(6)感染前，小心吸去培養(yǎng)基，每孔分別加入90 L對(duì)應(yīng)的完全培養(yǎng)基或FItransfer；從三管不同滴度（1 108TU/mL、1 107TU/mL、1 106TU/mL）的病毒液中分別吸取10 L加入對(duì)應(yīng)的孔中，即加入的病毒量分別為1 106 TU、1 105TU、1 104TU；每個(gè)孔內(nèi)液體的總體積為100 L，細(xì)胞的數(shù)目大約為1 104個(gè)，因此每組中3孔的MOI值分別為100、10、1。
(7)將培養(yǎng)基和病毒等試劑輕輕地充分混勻,之后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(8)感染8~16小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài)，棄去感染培養(yǎng)基，并加入100 L新鮮培養(yǎng)基。
(9)慢病毒感染3~4天后觀察熒光；如果細(xì)胞生長(zhǎng)比較緩慢，可以適當(dāng)延長(zhǎng)觀察時(shí)間，如感染的慢病毒帶有抗性篩選元件,則可以開始換液加藥篩選。

輝駿生物懸浮細(xì)胞的感染：
(1)培養(yǎng)細(xì)胞使其處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)；實(shí)驗(yàn)第一天，離心收集細(xì)胞，并用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將0.5 103~1 103個(gè)細(xì)胞接種至96孔板內(nèi)，每孔90 L培養(yǎng)基； 次日按不同MOI值添加病毒液及助感染試劑和培養(yǎng)基。其余操作同貼壁細(xì)胞的感染步驟。
(2)如果該細(xì)胞株不易受慢病毒感染，可以使用離心孵化的方法。即在細(xì)胞培養(yǎng)板上加入病毒感染液后,以2500rpm(1000-1500g)在32℃或者室溫下離心90min。

輝駿生物慢病毒感染正式實(shí)驗(yàn)：
按照換算原則，我們需要保持宿主細(xì)胞的MOI值不變，因此使用的病毒數(shù)目需要根據(jù)細(xì)胞數(shù)目的變化而做相應(yīng)調(diào)整。也就是說(shuō)，預(yù)實(shí)驗(yàn)所用的是96孔板，每孔的底面積為0.3 cm ，需要的培養(yǎng)基總體積為100 L，假設(shè)宿主細(xì)胞的MOI值為10（每孔細(xì)胞數(shù)量為1 104個(gè)），加入的病毒量應(yīng)為1 108 TU/mL的病毒1 L；正式實(shí)驗(yàn)中，如果我們采用的是6孔板，每孔的底面積為10 cm ，需要的培養(yǎng)基總體積通常為1mL，則加入的的病毒量為1 108 TU/mL的病毒20 L。
另外，如果正式實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)皿規(guī)格與預(yù)實(shí)驗(yàn)的不同，則可以按照換算好的比例先小范圍感染一次，進(jìn)一步確定感染時(shí)的最適慢病毒用量和細(xì)胞密度。

更多慢病毒實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)咨詢輝駿生物

廣州輝駿生物科技有限公司（簡(jiǎn)稱 輝駿生物 ）成立于2008年，位于廣州市科學(xué)城，是一家由在生物醫(yī)藥領(lǐng)域具有資深科研資歷人才組建的創(chuàng)新型科技企業(yè)，致力于為生物醫(yī)藥企業(yè)、高校、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及個(gè)人提供高品質(zhì)的技術(shù)服務(wù)。通過(guò)近十年的發(fā)展，公司擁有完善的分子生物，細(xì)胞生物，蛋白免疫，質(zhì)譜分析平臺(tái)，尤其擅長(zhǎng)于蛋白質(zhì)組學(xué)與代謝組學(xué)，蛋白-蛋白，蛋白-核酸及核酸-核酸相互作用的篩選和驗(yàn)證，及以此為基礎(chǔ)的整體課題服務(wù)。公司提供的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)已在50余篇SCI文章中發(fā)表，其中蛋白質(zhì)組學(xué)權(quán)威期刊10余篇。