亚洲欧美日本韩国_久久久久亚洲AV片无码V_亚洲AV片不卡无码一_H漫全彩纯肉无码网站

 
 
當(dāng)前位置: 首頁(yè) » 新聞資訊 » 廠商 » 正文

反向PCR (inverse-PCR)實(shí)驗(yàn)步驟_91化工儀器網(wǎng)

分享到:
放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-09-02  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):997
核心提示:nverse-PCR是克隆插入片段側(cè)翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽(yáng)性太多,而Inverse-PCR一般只要有特異條帶,基本上就是目的片段?;静襟E如下:1、反向PCR(Inverse PCR)原理:反向PCR是克隆T-DNA插入位點(diǎn)側(cè)翼DNA序列非常有效的方法。a. 選擇合適的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。并在T-DNA的邊界(左邊界、右邊界均可)和酶切位點(diǎn)附近設(shè)計(jì)引物P1、P2;b. 回收DNA,T4連接酶連接,使酶切后的DNA片段環(huán)化;c. 回收連接后的DNA,用引物P1、P2做PCR,就可

nverse-PCR是克隆插入片段側(cè)翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽(yáng)性太多,而Inverse-PCR一般只要有特異條帶,基本上就是目的片段。

基本步驟如下:

1、反向PCR(Inverse PCR)原理:反向PCR是克隆T-DNA插入位點(diǎn)側(cè)翼DNA序列非常有效的方法。

a. 選擇合適的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。并在T-DNA的邊界(左邊界、右邊界均可)和酶切位點(diǎn)附近設(shè)計(jì)引物P1、P2;

b. 回收DNA,T4連接酶連接,使酶切后的DNA片段環(huán)化;

c. 回收連接后的DNA,用引物P1、P2做PCR,就可擴(kuò)增到兩端為T-DNA插入序列,中間為側(cè)翼序列的片段。

2、限制性內(nèi)切酶消化:選擇合適的限制性內(nèi)切酶,基因組一定要切成彌散性的條帶。在酶切之前,應(yīng)對(duì)基因組DNA定量。

根據(jù)T-DNA的左邊界序列選擇合適的酶切位點(diǎn)EcoRI,BamHI和HindIII/PstI,并在酶切位點(diǎn)上游附近設(shè)計(jì)引物Z1,Z2,Z3和Z4,然后用這些內(nèi)切酶分別消化基因組DNA,酶切體系如下:

Buffer for EcoR I 

2 l

Genomic DNA 

3 l

EcoR I 

0.5 l (10u/ l)

ddH2O 

14.5 l

 

20 l 

37度 過一夜,電泳檢測(cè)酶切效果。

3、回收DNA

① 將酶切產(chǎn)物轉(zhuǎn)到1.5ml離心管中,用ddH2O洗滌干凈,并稀釋到250 l;

② 加入等體積的酚和氯仿(V:V=1:1),渦旋混勻,室溫靜置1min;

③ zui大速度(13, 000 rpm)離心1min;

④ 將上清移到另一管中,加入等體積的氯仿,渦旋混勻,室溫靜置1min;

⑤ zui大速度(13, 000 rpm)離心2min;

 


關(guān)注本網(wǎng)官方微信 隨時(shí)閱讀專業(yè)資訊

 
 
打賞
[ 新聞資訊搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 違規(guī)舉報(bào) ]  [ 關(guān)閉窗口 ]
免責(zé)聲明:
本網(wǎng)站部分內(nèi)容來源于合作媒體、企業(yè)機(jī)構(gòu)、網(wǎng)友提供和互聯(lián)網(wǎng)的公開資料等,僅供參考。本網(wǎng)站對(duì)站內(nèi)所有資訊的內(nèi)容、觀點(diǎn)保持中立,不對(duì)內(nèi)容的準(zhǔn)確性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保證。如果有侵權(quán)等問題,請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們,我們將在收到通知后第一時(shí)間妥善處理該部分內(nèi)容。
 

反向PCR (inverse-PCR)實(shí)驗(yàn)步驟_91化工儀器網(wǎng)二維碼

掃掃二維碼用手機(jī)關(guān)注本條新聞報(bào)道也可關(guān)注本站官方微信賬號(hào):"xxxxx",每日獲得互聯(lián)網(wǎng)最前沿資訊,熱點(diǎn)產(chǎn)品深度分析!
 

 
0相關(guān)評(píng)論

 
伊人久久综合无码成人网| 996久久国产精品线观看| 亚洲中文无码av在线| 日本边添边摸边做边爱喷水 | 尹人香蕉久久99天天拍| 久青草久青草视频在线观看| 日日噜噜夜夜狠狠视频| 高潮流白浆潮喷在线播放视频 | 男同gay毛片免费可播放| 亚洲av无码不卡一区二区三区| 欧美亚洲色综久久精品国产| 色综合久久久无码中文字幕波多| 亚洲日韩一区精品射精| 国产人妻777人伦精品hd| 国产美女自慰在线观看| 又粗又黄又猛又爽大片免费| 狠狠躁天天躁夜夜躁婷婷| 亚洲精品国产美女久久久| 性色欲网站人妻丰满中文久久不卡| 天堂8中文在线最新版在线| a级国产乱理伦片| 人妻体内射精一区二区| 国产suv精品一区二区| 精品国产一区二区三区av性色| 亚洲av人人澡人人爽人人夜夜| 免费特级毛片| 国产七十六+老熟妇| 亚洲国产精品久久久久婷蜜芽| 少妇人妻偷人精品视频| 国产在线精品一区二区三区直播| 久久精品九九亚洲精品| 久久久久久久综合狠狠综合| 50岁熟妇的呻吟声对白| 18女下面流水不遮图| 浪货趴办公桌~h揉秘书电影 | 欧美老熟妇欲乱高清视频| 免费视频成人片在线观看| 国产精品久久久久久久久久免费| 欧美白人最猛性xxxxx| 亚洲第一av导航av尤物| 99久久人妻精品免费二区|