-半乳糖苷酶( -GAL)測試盒 可見分光光度法
貨號:BC2580
規(guī)格:50管/24樣
測試方法:可見分光光度法
測定意義:
-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,能夠催化 半乳糖苷化合物中 半乳糖苷鍵水解,此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。 -GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲存的能量,還能在正常的多糖代謝、細胞壁組分代謝以及衰老時細胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解,釋放自由的半乳糖。
測定原理:
-GAL分解對-硝基苯- -D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算 -GAL活性。
自備用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體50mL 1 瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑 1 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入5mL 蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體15mL 1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體80mL 1 瓶,4℃保存。
標準液:液體1ml 1支,4℃保存,10 mol/ml對硝基苯酚溶液。
操作步驟:
一、 粗酶液提?。?/p>
1、 細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30 次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入1mL 提取液),進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
標準液的處理:用試劑二將標準液稀釋至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml.
二、 測定步驟:
1、 分光光度計預熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。
樣本測定(在EP 管中依次加入下列試劑):試劑名稱( L)
測定管
對照管
標準管
試劑一
200
蒸餾水
200
試劑二
250
250
樣本
50
50
迅速混勻,放入37℃準確水浴30min
標準液
500
試劑三
1000
1000
1000
充分混勻,400nm 處測定吸光值A(chǔ),計算 A=A 測定-A 對照。每個測定管需設(shè)一個對照管。
三、 -GAL 活性計算:
根據(jù)標準管的吸光度(x)和濃度(y,nmol/ml)建立標準曲線,將△A帶入標準曲線中,計算樣品生成的產(chǎn)物量(nmol/ml)。
(1) 按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg 組織蛋白每小時產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
-GAL 活力(nmol/h /mg prot)=(y V 反總) (V 樣 Cpr) T
=20 y Cpr
需要另外測定,建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
(2) 按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g 組織每小時產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
-GAL 活力(nmol/h /g 鮮重)=(y V 反總) (W V 樣 V 樣總) T
=20 y W
(3) 按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1 萬個細菌或細胞每小時產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
-GAL 活力(nmol/h /104 cell)= (y V 反總) (500 V 樣 V 樣總) T
=0.04 y
Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.5mL;V 樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.05mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細胞或細菌總數(shù),500 萬;T:反應(yīng)時間,0.5h。
-半乳糖苷酶( -GAL)測試盒 可見分光光度法訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預訂,海外期貨則需要提前3-6周預訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
-半乳糖苷酶( -GAL)測試盒 可見分光光度法運輸說明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶專用的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送至客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶專用冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶專用的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送至客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。