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高致病性豬藍耳病病毒核酸熒光PCR檢測-91化工儀器網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-09-02  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):114
核心提示:高致病性豬藍耳病病毒核酸熒光PCR檢測 上海研謹生物科技有限公司 價格:面議 生產(chǎn)地:品牌: 移動電話:13585717991公司傳真:QQ:847724139(微信同號) 更新時間:2019-06-13 021-65232515 服務(wù)熱線:400-66... 楊小姐(聯(lián)系我時,請說明是在91化工儀器網(wǎng)上看到的,謝謝) 各種實驗代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細胞檢測,食品安全檢測試劑,獸藥殘留檢測試劑,動物疫病類檢測,銷售高品質(zhì)標準品,對照品,ELISA試劑盒,細胞,血清,等等 上海研謹生物
高致病性豬藍耳病病毒核酸熒光PCR檢測 上海研謹生物科技有限公司

價格:面議

生產(chǎn)地:品牌:

移動電話:13585717991公司傳真:QQ:847724139(微信同號)

更新時間:2019-06-13


021-65232515 服務(wù)熱線:400-66...

楊小姐(聯(lián)系我時,請說明是在91化工儀器網(wǎng)上看到的,謝謝)


各種實驗代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細胞檢測,食品安全檢測試劑,獸藥殘留檢測試劑,動物疫病類檢測,銷售高品質(zhì)標準品,對照品,ELISA試劑盒,細胞,血清,等等


上海研謹生物科技有限公司提供RT-PCR技術(shù)服務(wù)、細胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)、原位雜交技術(shù)服務(wù)、免疫沉淀技術(shù)服務(wù)、Western Blotting技術(shù)服務(wù)、PCR實驗服務(wù),并為廣大科研用戶提供各種高品質(zhì)的高端化學試劑、生物學試劑、免疫學檢測,ELISA試劑盒、生化試劑盒、分析標準品、對照品、標準物質(zhì)、食品安全檢測試劑、動物疫病類檢測產(chǎn)品、獸藥殘留檢測試劑、細胞培養(yǎng)服務(wù)等,應(yīng)用覆蓋藥物分析領(lǐng)域、食品安全領(lǐng)域、聚合物研究領(lǐng)域、環(huán)境監(jiān)測領(lǐng)域,客戶廣泛分布于食品、制藥、第三方檢測、環(huán)境測試機構(gòu)、化工、科研院校、生物工程等行業(yè)。

 

主營:

1生化試劑、標準品對照品、標準物質(zhì)、

2.ELISA試劑盒、分離液、分離液試劑盒

3.細胞:原裝進口細胞、國產(chǎn)腫瘤細胞、國產(chǎn)正常細胞、腫瘤耐藥細胞

4.食品安全檢測試劑、動物疫病類檢測產(chǎn)品、獸藥殘留檢測試劑

5.耗材:常用實驗耗材、移液器


高致病性豬藍耳病病毒核酸熒光PCR檢測試劑盒

 

                   

前言

本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術(shù),是針對豬藍耳病毒設(shè)計的檢測體系,用于豬血清和組織等樣本的檢測。

 

試劑盒組成成分

組成成份(48Tests/kit)

規(guī)格

核酸擴增試劑

 

RT-PCR反應(yīng)液

994.5 l 1管

Taq酶(5U/ l)

15.5 l 1管

Enhancer

10.5 l 1管

對照品

 

陰性對照

25 l 1管

陽性對照

25 l 1管

 

儲存條件及有效期

本試劑盒貯存于-20℃的條件下有效期為6個月。

 適用儀器(熒光PCR檢測儀)

 ABI公司Prism7000、7300、7500系列

 RotorGene系列

 

 Bio-Rad公司的iCycler系列

【自備試劑】

核酸提取試劑。

【樣本采集、存放及運輸】

1.樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集。

2.存放:分離后的血清或血漿樣本在2℃ 8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(最多凍融3次)。

3.運輸:采用冰hu或泡沫箱加冰密封進行運輸。

【檢驗方法】

1.樣本處理(樣本處理區(qū)):

用戶可采用病毒RNA提取試劑盒提取RNA用于檢測或保存與-20℃(-80℃更佳)以待檢測。說明:陽性對照及陰性對照無需提取,直接上樣。

2.擴增試劑準備(PCR前準備區(qū)):

從試劑盒中取出RT-PCR 反應(yīng)液、Taq酶及PCR Enhancer,室溫融化并振蕩混勻后,2000rpm離心10秒。設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為n(n = 樣本數(shù) + 1管陰性對照 + 1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

RT-PCR反應(yīng)液

Taq酶

PCR enchancer

用量

19.5 l

0.3ul

0.2 l

計算好各試劑的使用量,加入一適當體積離心管中,充分混合均勻,2000rpm離心10秒,向設(shè)定的n個PCR反應(yīng)管中分別加入20 l,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

3.加樣(樣本處理區(qū)):

向所設(shè)定的n個PCR 反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA、陰性對照和陽性對照各5 l,蓋緊管蓋,轉(zhuǎn)移至檢測區(qū)。將PCR反應(yīng)管排好放入PCR儀內(nèi),記錄樣本擺放順序。

4.PCR擴增(檢測區(qū))

4.1 循環(huán)條件設(shè)置

50℃:30 min;

95℃:3 min;

95℃:10 sec, 60℃: 1min  40個循環(huán)。

熒光信號收集設(shè)在60℃。反應(yīng)體系設(shè)為25ul。

4.2 儀器檢測通道選擇

待測熒光為FAM熒光素,熒光PCR檢測儀熒光信號收集設(shè)定為FAM熒光素。

5.結(jié)果分析條件設(shè)定:

5.1 閾值(threshold)設(shè)定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照曲線(無規(guī)則的噪音線)的最高點為準。

5.2 基線(baseline)應(yīng)選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(循環(huán)數(shù))應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(循環(huán)數(shù))應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1-2個循環(huán)。

注:具體設(shè)置方法請參照各儀器使用說明書。

6.質(zhì)控標準:

陰性對照的檢測結(jié)果應(yīng)為陰性;

 

陽性對照的Ct值應(yīng)小于等于32.0。

1.結(jié)果判斷:

 Ct值無讀數(shù)的樣本為陰性。

 Ct值 38.0的樣本為陽性。

 Ct值大于38.0的樣本建議重做。

重做結(jié)果Ct值<40.0為陽性,否則為陰性。

【試劑盒使用注意事項】

1. 有關(guān)實驗室管理規(guī)范請嚴格按照行業(yè)行政主管部門頒布的有關(guān)基因擴增檢驗實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。

2. 本試劑盒僅用于體外檢測。

3. 實驗請嚴格分區(qū)操作:

第一區(qū):PCR前準備區(qū) 準備擴增所需試劑;

第二區(qū):樣本處理區(qū) 待測樣本和對照品處理;

第三區(qū):檢測區(qū) PCR擴增檢測。

4. 各區(qū)物品均為專用,不得交叉使用,避免污染,實驗后即請清潔工作臺。

5. 試劑盒內(nèi)各試劑使用前,充分融化后請稍事離心。

6. 在-20℃保存的樣本裂解產(chǎn)物,應(yīng)在加樣前置室溫解凍,作短暫離心后使用。

7. 分裝有反應(yīng)液的反應(yīng)管應(yīng)扣蓋或裝入密實袋內(nèi)再轉(zhuǎn)移至樣本區(qū)。

8. 加樣時應(yīng)使樣品完全落入反應(yīng)液中,不應(yīng)有樣品粘附于管壁上,加樣后應(yīng)盡快蓋緊管蓋。

9. 擴增完畢立即取出反應(yīng)管,密封在專用塑料袋內(nèi),丟棄于指定地點。

10. 反應(yīng)液分裝時應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡,上機前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊,以免熒光物質(zhì)泄露污染儀器。

11. 實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%次氯酸鈉的廢物缸內(nèi),并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

12. 工作臺及各物品定期用1%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈進行消毒。

1.結(jié)果判斷:

 Ct值無讀數(shù)的樣本為陰性。

 Ct值 38.0的樣本為陽性。

 Ct值大于38.0的樣本建議重做。

重做結(jié)果Ct值<40.0為陽性,否則為陰性。

【試劑盒使用注意事項】

1. 有關(guān)實驗室管理規(guī)范請嚴格按照行業(yè)行政主管部門頒布的有關(guān)基因擴增檢驗實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。

2. 本試劑盒僅用于體外檢測。

3. 實驗請嚴格分區(qū)操作:

第一區(qū):PCR前準備區(qū) 準備擴增所需試劑;

第二區(qū):樣本處理區(qū) 待測樣本和對照品處理;

第三區(qū):檢測區(qū) PCR擴增檢測。

4. 各區(qū)物品均為專用,不得交叉使用,避免污染,實驗后即請清潔工作臺。

5. 試劑盒內(nèi)各試劑使用前,充分融化后請稍事離心。

6. 在-20℃保存的樣本裂解產(chǎn)物,應(yīng)在加樣前置室溫解凍,作短暫離心后使用。

7. 分裝有反應(yīng)液的反應(yīng)管應(yīng)扣蓋或裝入密實袋內(nèi)再轉(zhuǎn)移至樣本區(qū)。

8. 加樣時應(yīng)使樣品完全落入反應(yīng)液中,不應(yīng)有樣品粘附于管壁上,加樣后應(yīng)盡快蓋緊管蓋。

9. 擴增完畢立即取出反應(yīng)管,密封在專用塑料袋內(nèi),丟棄于指定地點。

10. 反應(yīng)液分裝時應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡,上機前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊,以免熒光物質(zhì)泄露污染儀器。

 

11. 實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%次氯酸鈉的廢物缸內(nèi),并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

卡那霉素快速檢測試紙條

豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒

 
關(guān)鍵詞: 樣本 擴增 對照 熒光 陰性
 
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