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尼帕病毒（NIPAH）熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒適用于檢測(cè)的疑似感染病人的靜脈血等標(biāo)本中尼帕病毒 RNA，適用于尼帕病毒感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
本試劑盒用一對(duì)尼帕病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)尼帕病毒 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

尼帕病毒（NIPAH）熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

商品名稱(chēng)：尼帕病毒（NIPAH）核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR 熒光探針?lè)?

Name ：Diagnostic Kit for Nipah Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)的疑似感染病人的靜脈血等標(biāo)本中尼帕病毒 RNA，適用于

尼帕病毒感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用一對(duì)尼帕病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒

光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)尼帕病毒 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的

病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

名 稱(chēng) 規(guī) 格

酶液 50 l 1 管

NIPAH 反應(yīng)液 1.0ml 1 管

NIPAH 陽(yáng)性質(zhì)控品 50 l 1 管

陰性質(zhì)控品 250 l 1 管

說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃ 5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次，

有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

疑似感染病人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)

本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

按 RNA 提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行提取。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取

法），請(qǐng)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿(mǎn) 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑 NIPAH 反應(yīng)液 酶液

用量 20 l 1 l

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4 l，分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇：

檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿

選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間 收集熒光信號(hào)

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲

線(xiàn)出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動(dòng)閾值線(xiàn)至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值 35.0，且曲線(xiàn)有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線(xiàn)；

可疑：檢測(cè)通道 35.0 Ct 值 37，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 35.0 Ct

值 37，且曲線(xiàn)有明顯的增長(zhǎng)曲線(xiàn)，判定為陽(yáng)性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值 37 或無(wú) Ct 值。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線(xiàn)或無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線(xiàn)有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值 32；

以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽(yáng)性參考品符合率：5 份陽(yáng)性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率

為 100％。

最低檢測(cè)限：5.0 102copies/ml。

精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。

 

尼帕病毒（NIPAH）熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：

0232豬藍(lán)耳病病毒經(jīng)典型(PRRSV-C)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T0222高致病性豬藍(lán)耳病病毒(PRRSV-M)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-48T0212豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T0132口蹄疫病毒O型(FMDV-O)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法48T0122口蹄疫病毒亞洲1型(FMDV-Asia1)核酸檢測(cè)試劑盒(R48T0112口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR48T0412鉤端螺旋體(Lep)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T0312布氏桿菌(BS)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T
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