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BL21(AI)感受態(tài)細(xì)胞_91化工儀器網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-09-02  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):460
核心提示:貨號(hào):CM-6039G供應(yīng)商:上海淳麥數(shù)量:1000只英文名:Mach1-T1Chemically Competent Cell保質(zhì)期:1年保存條件:零下80度規(guī)格:20*100ulBL21(AI)感受態(tài)細(xì)胞基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)gal dcmaraB::T7RNAP-tetABL21(AI)感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說明:High5TM系列BL21(AI)感受態(tài)細(xì)胞是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r),BL21(AI)來源于BL21菌株,為膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。該酶的缺失
貨號(hào):CM-6039G供應(yīng)商:上海淳麥數(shù)量:1000只英文名:Mach1-T1Chemically Competent Cell保質(zhì)期:1年保存條件:零下80度規(guī)格:20*100ul

BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞基因型:

F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說明:

 High5TM系列BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r),BL21(AI) 來源于BL21菌株,為膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。
該酶的缺失能夠有效防止表達(dá)的異源目的蛋白在細(xì)菌體內(nèi)的降解。
使用L-阿拉伯糖誘導(dǎo)araBAD啟動(dòng)子下游的蛋白表達(dá)。使用葡萄糖可以抑制araBAD啟動(dòng)子下游的蛋白表達(dá)。BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞適用于任何以T7啟動(dòng)子為基礎(chǔ)的表達(dá)載體,能夠進(jìn)行高水平的重組蛋白表達(dá)。因?yàn)榫牦w內(nèi)的T7 RNA聚合酶水平能夠進(jìn)行有效調(diào)節(jié),BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞能夠有效表達(dá)對(duì)其他BL21細(xì)胞有毒或生長(zhǎng)抑制的蛋白。從BL21(AI) 菌株中獲得目的重組蛋白產(chǎn)量,和其他BL21菌株產(chǎn)量相當(dāng)。 High5TM系列BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/ g。

BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞操作說明: 取100 l冰上融化的BL21(AI)感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激90秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

 向離心管中加入700 l不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。


4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100 l左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含50 g/ml四環(huán)素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。

 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意:

Brian Caliendo (Voigt 實(shí)驗(yàn)室)報(bào)道過pCP20質(zhì)粒比較難于轉(zhuǎn)化到這個(gè)感受態(tài)細(xì)胞中,而pCP20轉(zhuǎn)化到其他菌株中都很正常,但是菌體原因未知。

2. 即使不加葡萄糖,BL21(AI) 細(xì)胞的araBAD啟動(dòng)子下游的本底蛋白表達(dá)水平仍然很低,加入葡萄糖后能夠進(jìn)一步的降低本底蛋白的表達(dá)水平。

BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng) 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。 誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。
 

建議選擇該菌株進(jìn)行蛋白表達(dá)的條件如下:

 使用T7啟動(dòng)子載體(高拷貝或者低拷貝都可以)進(jìn)行蛋白表達(dá)。 使用其他BL21進(jìn)行蛋白表達(dá)時(shí),觀察到明顯的細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制作用。

3. 表達(dá)一個(gè)已知的毒性蛋白。

上海淳麥生物科技有限公司  感受態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)專家  4006815880


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