萊克多巴胺

快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

一、原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物萊克多巴胺將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗萊克多巴胺抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物萊克多巴胺的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物萊克多巴胺的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度： 0.05ppb孵育溫度： 25℃孵育時(shí)間： 30min～15min樣本檢測(cè)下限

組 織   0.2ppb

尿 樣   0.1ppb

交叉反應(yīng)率

萊克多巴胺（Ractopamine）  100%

多巴酚丁胺（dobutamine）    1%

沙丁胺醇（Salbutamol ）  0.1%

克倫特羅（Clenbuterol）   0.1%

樣本回收率

組織、尿樣   60%~120%

三、試劑盒組成

1

微量測(cè)試孔

每條8孔，一板12條

2

標(biāo)準(zhǔn)液 6瓶

（1ml/瓶）

0ppb

0.05ppb

0.15ppb

0.45ppb

1.35ppb

4.05ppb

3

酶標(biāo)記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

15ml

白色帽

9

2X濃縮提取液

50ml X 2

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）、恒溫箱、打印機(jī)

微量移液器：?jiǎn)蔚?nbsp;20～200 l、單道100～1000 l、多道30～300 l

試 劑：氫氧化鈉、濃鹽酸

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理需配制：

配液1 0.2M 鹽酸

取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L。

配液2 1M 氫氧化鈉

 稱取4g 氫氧化鈉固體加去離子水定溶至 

 100ml。

配液3 樣本提取液

 2X濃縮提取液用去離子水1：1稀釋。

樣本處理： 

（a）組織樣本的處理方法

稱取 2 0.05g 均質(zhì)后的組織于50ml離心管中，加入3ml 0.2M鹽酸（見配液1），充分振蕩3min。再加入600ul 1M 氫氧化鈉（見配液2）溶液和2.4ml 樣本提取液（見配液3）溶液，充分振蕩3min，室溫4000r/min 以上離心10min。取50  l上層液體用于分析。（注：離心后若有脂肪層，去除脂肪層或撥開脂肪層，取清澈液體進(jìn)行分析）。

樣本稀釋倍數(shù)： 4倍

注：此方法可與克倫特羅，沙丁胺醇處理方法通用。

（b）尿樣樣本的處理方法

取50 l清亮尿樣直接測(cè)定（如果尿樣渾濁一定要過(guò)濾或4000r/min離心10min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

樣本稀釋倍數(shù):  1倍

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

測(cè)定前應(yīng)須知：使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。所有恒溫孵育過(guò)程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。操作步驟：從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。配液：洗滌液配制

將15ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水

按照1:19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子

水），或按所需用量配制洗滌液。

編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50 l/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50 l/孔，再加入50 l/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液250 l/孔洗板4～5次，每次間隔15-～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。顯色：加入底物A液50 l/孔，再加入底物B液50 l/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。測(cè)定：加入終止液50 l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，5min內(nèi)讀數(shù)），測(cè)定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.05ppb為1.816；0.15ppb為1.415；0.45ppb為0.74；1.35ppb為0.313；4.05ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb～4.05ppb；樣本2的濃度范圍是0.15ppb～0.45ppb，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺實(shí)際濃度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即

 

百分吸光率（%）＝

B

100%

B0

B 標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0 0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎咨詢索?。?/p>

八、 注意事項(xiàng)

室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作?；旌弦鶆?，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化；不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。該試劑盒理想反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2～8℃保存，不要冷凍。保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)放心使用。

 

 

 

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒說(shuō)明書

貼壁細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)換液步驟

小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（bEnd.3）培養(yǎng)說(shuō)明書

[ 打印 ] [ 返回頂部 ] [ 關(guān)閉 ]