三步法（以 SP 試劑盒為例）

1. 石蠟切片脫蠟至水。

2. 蒸餾水沖洗， PBS 浸泡 5 分鐘，如需采用抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行。

3. 3%H2O2 室溫孵育 5~10 分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，PBS 沖洗，2 分鐘 3 次。

4. 5~10% 正常山羊血清封閉，室溫孵育 10 分鐘。傾去血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃ 孵育 1~2 小時(shí)或 4℃ 過(guò)夜。

5.  PBS 沖洗，2 分鐘 3 次。

6. 滴加適當(dāng)比例稀釋的生物素標(biāo)記二抗（1%BSA-PBS 稀釋?zhuān)?7℃ 孵育 10~30 分鐘；或滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液，37℃ 或室溫孵育 10~20 分鐘。

7.  PBS 沖洗，2 分鐘 3 次。

8. 滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素（ PBS 稀釋?zhuān)?7℃ 孵育 10~30 分鐘；或第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃ 或室溫孵育 10~20 分鐘。

9. PBS 沖洗，2 分鐘 3 次。

10. 顯色劑顯色（ DAB 或 AEC）。

11. 自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水透明（如需要）、封片。

二步法（以 PV-9000 通用型二步法檢測(cè)試劑盒為例）

1. 石蠟切片脫蠟至水。

2. 蒸餾水沖洗，PBS 浸泡 5 分鐘，如需采用抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行。

3. 3% H2O2 室溫孵育 5~10 分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，PBS 沖洗，2 分鐘 3 次。

4. 滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃ 孵育 1~2 小時(shí)或 4℃ 過(guò)夜。

5. PBS 沖洗，2 分鐘 3 次。

6. 滴加試劑 1（Polymer Helper），室溫或 37℃ 孵育 20 分鐘，PBS 或 TBS 沖洗，2 分鐘 3 次。

7. 滴加試劑 2（poly peroxidase-anti-mouse/rabbit IgG），室溫或37℃ 孵育 20~30 分鐘，PBS 或 TBS 沖洗，2 分鐘 3 次。

8. PBS 沖洗，2 分鐘 3 次。

9. 顯色劑顯色（DAB 或 AEC）。

10. 自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水透明（如需要）、封片。