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慶大霉素快速檢測(cè)試劑盒說明書，公司的獸藥殘留快速檢測(cè)試劑盒（例：克倫特羅檢測(cè)試劑盒、氯霉素檢測(cè)試劑盒、硝基呋喃類檢測(cè)試劑盒）、動(dòng)物疾病診斷試劑（例：豬弓形蟲抗體檢測(cè)試劑盒、豬藍(lán)耳病檢測(cè)試劑盒、豬瘟病毒檢測(cè)試劑盒）、分子生物學(xué)專用工具酶、綠色水產(chǎn)藥品等一系列的產(chǎn)品已在國家機(jī)關(guān)、企業(yè)、科研單位廣為應(yīng)用。 【詳細(xì)說明】

 

 

慶大霉素快速檢測(cè)試劑盒說明書

 

一、原理

 

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物慶大霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗慶大霉素抗體，加入酶標(biāo)記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物慶大霉素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物慶大霉素的含量。

 

二、試劑盒特性

 

試劑盒靈敏度：  0.05ppb

 

u 孵育溫度： 25℃

 

u 孵育時(shí)間： 30min～15min

 

樣本檢測(cè)下限

 

組織

2.5 ppb

肝臟

3 ppb

牛奶

3 ppb

 

交叉反應(yīng)率

 

慶大霉素

100%

鏈霉素

1%

雙氫鏈霉素

1%

新霉素

1%

 

樣本回收率

 

組織 90% 20%

 

肝臟 80% 20%

 

牛奶  90% 18%

 

三、試劑盒組成

 

1

微量測(cè)試孔

每條 8 孔，一板 12 條

 

 

 

 

 

標(biāo)準(zhǔn)液 6 瓶

0ppb

0.05ppb

2

0.15ppb

0.45ppb

（1ml/瓶）

 

1.35ppb

4.05ppb

 

 

 

 

 

 

 

3

酶標(biāo)記物

7ml

紅色帽

 

 

 

 

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

 

 

 

 

5

底物 A 液

7ml

白色帽

 

 

 

 

6

底物 B 液

7ml

黑色帽

 

 

 

 

7

終止液

7ml

黃色帽

 

 

 

 

8

20X 濃縮洗滌液

15ml

白色帽

 

 

 

 

9

樣本復(fù)溶液

50ml

透明帽

 

 

 

 

10

10x 濃縮提取液

50ml

藍(lán)色帽

 

 

 

 

 

四、所用儀器、試劑

 

具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量 0.01g）、恒溫箱

 

微量移液器：單道 20～200 l、單道 100～1000 l、

 

多道 30～300 l

 

五、樣本前處理步驟

 

樣本處理前須知

 

（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

 

（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

 

樣本前處理需配制：配液 1 樣本提取液：

 

10X 濃縮提取液用去離子水按 1：9 稀釋。樣本處理：

 

（a）組織（雞肉、豬肉、魚肉、蝦）、肝臟（雞肝、豬肝）樣本處理方法

1、取 1 0.05g 去除脂肪的粉碎樣本，加入 5ml 樣本提取液，振蕩 3min；4000r/min，室溫離心

 

10min；2、取 50 l 上清液，加入 450 l 樣本復(fù)溶液混勻，

 

混合 30s；3、取 50 l 用于分析。

 

樣本稀釋倍數(shù)：50

 

（b） 牛奶樣本處理方法

 

1、取 0.5ml 均質(zhì)的牛奶樣本，加入 2ml 樣本提取

 

液，振蕩 2min；4000r/min，室溫離心 5min；2、取 50 l 上清液，加入 450 l 樣本復(fù)溶液混勻，

混合 30s；3、取 50 l 用于分析。

 

樣本稀釋倍數(shù)：50

 

六、酶標(biāo)免疫分析程序:

 

測(cè)定前應(yīng)須知：

 

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫

 

（20～25℃）。

 

2、 使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃。

 

3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是 ELISA 測(cè)定程序中的要點(diǎn)。

 

4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟：

 

1、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～

 

25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

 

2、取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放

 

入自封袋，保存于 2-8℃。

 

3、配液：將 15ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份

去離子水），或按所需用量配制洗滌液。4、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每

 

個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

 

5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50 l/孔到各自的微孔中，加入酶標(biāo)記物 50 l/孔，然后再加入抗體工作液 50 l/ 孔，用蓋板膜封板，25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。

 

6、將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液 250 l/孔洗板 4～5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

 

7、顯色：加入底物 A 液 50 l/孔，再加入底物 B 液 50 l/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色 15min。

 

8、測(cè)定：加入終止液 50 l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處（建議用雙波長 450/630n m 檢測(cè)，5min 內(nèi)讀數(shù)），測(cè)定每孔 OD 值。

 

七、結(jié)果判定

 

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方法，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含慶大霉素量成負(fù)相關(guān)。

 

1、粗略判定：

 

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3，樣本 2 的吸光度值為 1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：

 

0ppb 為 2.243；0.05ppb 為 1.816；0.15ppb 為 1.415； 0.45ppb 為 0.74；1.35ppb 為 0.313；4.05ppb 為 0.155。則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb～4.05ppb；樣本 2

 

的濃度范圍是 0.15ppb～0.45ppb，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大霉素實(shí)際濃度。

2、定量分析

 

（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0 標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以 100%，即

 

B

百分吸光率（%）＝ 100%

B0

 

B 標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0 0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

 

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以慶大霉素標(biāo)

 

準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大霉素實(shí)際濃度。

 

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

 

 

八、 注意事項(xiàng)

 

1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20～

 

25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

 

2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

 

3、混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

 

4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸，避免接觸皮膚。

 

5、不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD 值變化；不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

 

6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

 

7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

 

8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為 25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

 

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

 

1、儲(chǔ)藏條件：試劑盒于 2～8℃保存，不要冷凍。

 

2、保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年，生產(chǎn)日期見包裝盒。

 

提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)放心使用。

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*驗(yàn)證碼:  = 請(qǐng)輸入計(jì)算結(jié)果（填寫阿拉伯?dāng)?shù)字），如：三加四=7