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關于HE染色法的具體操作步驟,你都知道哪些?_91化工儀器網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-09-02  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):490
核心提示:關于HE染色法的具體操作步驟,你都知道哪些?HE染色原理HE 染色法為蘇木精-伊紅染色法,是石蠟切片技術里常用的染色法之一,也是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中zui基礎、zui廣泛的技術方法。屬性為堿性的蘇木素染色液可以使細胞著藍色,為酸性的伊紅使細胞著紅色,其結果胞核呈藍色,胞漿呈紅色。兩種不同的染色液使細胞通過顏色來改變折光率,在光鏡下呈現(xiàn)出細胞圖像。HE染色法之所以成為細胞染色zui常用的方法是因為HE染色法過程中除化學反應外,還有物理作用中吸附、吸收效果,使HE染色提供良好的核漿對比染色效果。

關于HE染色法的具體操作步驟,你都知道哪些?

HE染色原理
HE 染色法為蘇木精-伊紅染色法,是石蠟切片技術里常用的染色法之一,也是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中zui基礎、zui廣泛的技術方法。
屬性為堿性的蘇木素染色液可以使細胞著藍色,為酸性的伊紅使細胞著紅色,其結果胞核呈藍色,胞漿呈紅色。兩種不同的染色液使細胞通過顏色來改變折光率,在光鏡下呈現(xiàn)出細胞圖像。
HE染色法之所以成為細胞染色zui常用的方法是因為HE染色法過程中除化學反應外,還有物理作用中吸附、吸收效果,使HE染色提供良好的核漿對比染色效果。
HE染色實驗步驟
1、樣品制備:對于貼壁生長細胞,胰酶消化,調整細胞濃度約1 105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養(yǎng)相應時間后,取出細胞爬片,用PBS洗滌3次。
2、樣品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗滌2次,每次1min。
3、染核:蘇木素染液染色2-3min,自來水洗滌。
4、分色:鏡下觀察,若細胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,自來水洗滌。
5、染胞質:浸入伊紅染液染色1min,自來水洗滌。
6、吹干或自然晾干細胞爬片后,中性樹膠封片。
若細胞用4%多聚甲醛固定,則染色時間相應延長,蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可。
HE染色實驗結果
細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。著情況與組織或細胞的種類有關,也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時,伊紅著色由淺變深。
實驗相關用品
1、固定液:常用95%乙醇和冰丙酮
2、蘇木精染液:稱取蘇木精粉0.5g,銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中,然后取NaIO 31g,水5ml,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均勻,濾紙過濾,備用。
3、伊紅染液:稱取0.5g水溶性伊紅染液,溶于100ml蒸餾水中。
4、稀鹽酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%鹽酸。
5、系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠。
6、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、眼科鑷、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。


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