大鼠去甲腎上腺素（NE）酶聯(lián)免疫

 檢測試劑盒使用說明書         AE98983Ra

使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理，來檢測大鼠去甲腎上腺素（NE），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學診斷。

用 途：用于大鼠血清、血漿及相關液體樣本中去甲腎上腺素（NE）測定。

工作原理

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠去甲腎上腺素（NE）水平。向預先包被了大鼠去甲腎上腺素（NE）單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠去甲腎上腺素（NE），溫育；溫育后，加入生物素標記的抗NE抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠去甲腎上腺素（NE）的濃度呈正相關。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1份

1份

 

封板膜

2片（48）

2片（96）

 

密封袋

1個

1個

 

酶標包被板

1 48

1 96

2-8℃保存

標準品400 ng/L

0.5ml 1瓶

0.5ml 1瓶

2-8℃保存

標準品稀釋液

3ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

鏈霉親和素-HRP

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

生物素標記的抗NE抗體

0.5ml 1瓶

1 ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

終止液

3ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

濃縮洗滌液

（20ml 20倍） 1瓶

（20ml 30倍） 1瓶

2-8℃保存

需要而未提供的試劑和器材

37℃恒溫箱。標準規(guī)格酶標儀。精密移液器及一次性吸頭蒸餾水，一次性試管吸水紙

注意事項

從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本要求 

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

操作程序

標準品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)

200 ng/L

5號標準品

120 l的原倍標準品加入120 l標準品稀釋液

100 ng/L

4號標準品

120 l的5號標準品加入120 l標準品稀釋液

50 ng/L

3號標準品

120 l的4號標準品加入120 l標準品稀釋液

25 ng/L

2號標準品

120 l的3號標準品加入120 l標準品稀釋液

12.5 ng/L

1號標準品

120 l的2號標準品加入120 l標準品稀釋液

根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。加樣：1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗NE抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A B和終止液，其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；3）待測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗NE抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50 l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 終止：每孔加終止液50 l，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。

操作程序總結：

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.92以上。

2.批內(nèi)與批間應分別小于9%和15%

檢測范圍：

檢測范圍：8 ng/L -200 ng/L。

保存條件及有效期：

保存：2-8℃。

有效期：6個月(2-8℃)。