更亮、更快、更準(zhǔn)

雙熒光素酶報告基因常用于啟動子對基因表達影響的研究。將所研究目的基因的調(diào)控序列克隆到含有報告基因的表達質(zhì)粒中，然后將重組質(zhì)粒導(dǎo)入適當(dāng)?shù)募毎?，通過測定報告基因表達的水平來間接評價在調(diào)控序列指導(dǎo)下啟動子對基因表達的誘導(dǎo)作用。

熒光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中不含內(nèi)源性熒光素酶，轉(zhuǎn)錄后無需修飾即具有報告基因的功能。

螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）大小為61KDa，單亞基蛋白，能夠催化熒光素（luciferin）氧化，生成氧化熒光素oxyluciferin；海參熒光素酶（Renilla luciferase）為36 KDa的單亞基蛋白，能夠催化腔腸素（coelenterazine）氧化形成coelenteramide。二者在翻譯后均無需修飾即可發(fā)揮作用。

通常情況下，海參熒光素酶作為內(nèi)參，用以減少內(nèi)在因素的某些變化對實驗所造成的影響。

該試劑盒先對轉(zhuǎn)染后的細胞進行裂解，然后以熒光素為底物檢測螢火蟲熒光素酶的活性，之后在淬滅該熒光反應(yīng)的同時，以腔腸素為底物檢測海參熒光素酶報告基因的活性；具有檢測信號強、線性范圍廣、無內(nèi)源活性干擾等特點。

檢測試劑和熒光素酶相互作用，可獲得zui佳的發(fā)光強度

加入海腎熒光素酶底物后，螢火蟲熒光素發(fā)光淬滅情況：基本能夠完全淬滅。

品牌

價格（元）

T品牌

20.64

P品牌

18.04

Yeasen

12.65

Q1：雙熒光素酶報告基因zui適反應(yīng)溫度？

A：室溫（20-22℃）。反應(yīng)時各個組分（細胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫。此兩種熒光素酶的反應(yīng)速率是受溫度影響的，為了保證實驗的一致性，我們推薦此兩種工作液在檢測時都孵育至室溫。

Q2：雙熒光素酶報告基因載體該如何選擇？

A：1）螢火蟲熒光素酶建議選取pGL-3或pGL-4或者自己構(gòu)建的載體

  2）海參熒光素酶建議選取phRL-TK或pGL-4載體或者自己構(gòu)建相應(yīng)的載體。建議海參載體不使用強啟動子（如SV40、CMV），而選用中等強度的啟動子（如TK）。

Q3：檢測的熒光數(shù)值很低怎么辦？

A：檢測的熒光數(shù)值很低說明細胞裂解液中的熒光素酶含量很低。通常解決辦法為

1）轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒采用細胞轉(zhuǎn)染級別的質(zhì)粒抽提試劑盒抽提。

2）優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，盡可能的提高轉(zhuǎn)染效率。

3）增加實驗的細胞量，并且裂解細胞時，適當(dāng)減少細胞裂解液的量。

Q4：進行檢測的過程中，熒光信號值太高該如何進行調(diào)整？

A：1）在轉(zhuǎn)染實驗后，減少細胞的孵育時間。

2）降低熒光信號采集時間。

3）進行樣品的稀釋。

Q5：螢火蟲熒光素酶讀值和海腎熒光素酶讀值的比例多少時比較合適？

A：盡量保證對照組的螢火蟲熒光素酶的讀值和海腎熒光素酶的讀值接近，或者海腎熒光素酶的讀值比螢火蟲熒光素酶的讀值稍高。對于具體的實驗過程中，由于螢火蟲熒光素酶質(zhì)粒和海腎熒光素酶的質(zhì)粒抽提的質(zhì)量不一致，待檢測目的調(diào)控元件的調(diào)控能力的不同等原因，一次實驗很難達到一個比較好的實驗結(jié)果，因此對于此實驗，我們推薦預(yù)實驗優(yōu)化螢火蟲熒光素酶質(zhì)粒和海腎熒光素酶質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染量。

Q6：細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染時使用96孔板還是6孔板或者其他規(guī)格的細胞培養(yǎng)板？

A：本試劑盒zui低檢測限約為10-10 mg/mL 熒光素酶。一般來說，如果能保證10%的轉(zhuǎn)染效率，96孔板的細胞量就能夠達到實驗要求。如果細胞很難轉(zhuǎn)染或者待檢測的調(diào)控原件的調(diào)控作用很弱，可以增加實驗的細胞量。

Q7：此試劑盒采用何種儀器檢測比較好？

A：能夠檢測化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都可適用于此試劑盒。如果使用多功能酶標(biāo)儀，為防止各孔之間的干擾，我們推薦使用黑色酶標(biāo)板，并且不同實驗組之間zui好有間隔。

Q8：螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液和海腎熒光素酶反應(yīng)工作液如何配置，配置之后如何保存？

A：本試劑盒中螢火蟲熒光素酶底物和海腎熒光素酶底物統(tǒng)一采用50X的包裝形式。分別用相應(yīng)的緩沖液配置成1X 工作液即可。例如取100 L（50X） 螢火蟲熒光素酶底物加入到5 mL螢火蟲熒光素酶緩沖液中，即為螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液。

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編碼

規(guī)格

價格（元）

Luciferase Reporter Plasmid negative control（熒光素酶報告基因質(zhì)粒陰性對照）

11555ES03

1 g

938.00

pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control

pGM-CMV-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒陽性對照

11556ES03

1 g

938.00

pGMLR-TK luciferase reporter（pGMLR-TK海腎熒光素酶報告基因質(zhì)粒）

11557ES03

1 g

938.00

pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海腎熒光素酶報告基因質(zhì)粒）

11558ES03

1 g

938.00

螢火蟲熒光素酶報告基因質(zhì)粒

NF- B

STAT3

STAT1

SREBP

SP1

Sox2

RAR

RBP-JK

PPAR

NFAT

Nanog

MTF1

MEF2

LXR

KLF4

ISRE

IRF1

HIF-1

HSF

HNF4

GRE

GLI

GATA

GAS

FOXO

EGR1

CREB

c-Jun

C/EBP

ATF6

AARE

AP-1

AR

AhR

Oct4

Pax6

p53

GAL4

TCF/LEF1

SMAD

Myc

SRE

E2F

ERSE

ARE

PU.1

Rb

AFP1

AP3

AREB6

ATF1

BMP

C/EBP

C-REL

DBP

Elk1

ERR

ERR

ERRE

FXR

GCNF

HNF1

LXRE

MEF1

MEF3

PPAR

ROR 2

ROR

RORE

RXR

SRF

STAT4

YY1

GLI3

STAT6

SRE

VDR

PR

ER

IL6-promoter

TNF- -promoter

AAT-promoter

STAT5

MR

NRSF

報告基因慢病毒顆粒

NF- B

VDR

STAT3

STAT1

SREBP

SP1

Sox2

RAR

RBP-JK

PR

PPAR

NFAT

Nanog

MTF1

MEF2

LXR

KLF4

ISRE

IRF1

HIF-1

HSF

HNF4

GATA

GAS

FOXO

GRE

GLI

c-Jun

C/EBP

ATF6

EGR1

CREB

AR

AhR

Oct4

AARE

AP-1

GAL4

TCF/LEF1

SMAD

Pax6

p53

E2F

ERSE

ARE

Myc

SRE

AFP1

AP3

AREB6

PU.1

Rb

C/EBP

C-REL

DBP

ATF1

BMP

ERR

ERRE

FXR

Elk1

ERR

LXRE

MEF1

MEF3

GCNF

HNF1

PPAR

ROR

ROR

MR

NRSF

SRF

STAT4

YY1

RORE

RXR

GFP報告基因質(zhì)粒

NF- B

VDR

STAT3

STAT1

SREBP

SP1

Sox2

RAR

RBP-JK

 PR

PPAR

NFAT

Nanog

MTF1

MEF2

LXR

KLF4

GATA

GAS

FOXO

HSF

HNF4

c-Jun

C/EBP

ATF6

GRE

GLI

AR

AhR

Oct4

EGR1

CREB

GAL4

TCF/LEF1

SMAD

AARE

AP-1

E2F

ERSE

ARE

Pax6

p53

AFP1

AP3

AREB6

Myc

SRE

C/EBP

C-REL

DBP

PU.1

Rb

ERR

ERRE

FXR

ATF1

BMP

LXRE

MEF1

MEF3

Elk1

ERR

PPAR

ROR

ROR

GCNF

HNF1

SRF

STAT4

YY1

MR

NRSF

SRE

RORE

RXR

GLI3

STAT6