苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine ammonialyase,PAL)試劑盒 分光光度法 50管/48樣
注意:正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
PAL(EC4. 3 1 5)廣泛存在于各種植物和少數微生物中,是植物體內苯丙烷類代謝的
關鍵酶,與一些重要的次生物質如木質素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關,
在植物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。
測定原理
PAL催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在 290nm處有zui大吸收值,
通過測定吸光值升高速率計算 PAL活性。
所需的儀器和用品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰
和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液:液體 60mL 1瓶,4℃保存。
試劑一:液體 40mL 1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑 3 瓶,4℃保存。臨用前每瓶加入 4mL 蒸餾水水充分溶解待用;用不完的試劑 4℃保存;
試劑三:液體 2.5mL 1瓶,4℃保存。
粗酶液提取
按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL
提取液),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
試劑名稱( L)
測定管
對照管
樣本
20
試劑一
700
800
試劑二
200
200
混勻,30℃ 準確水浴 30min
試劑三
40
40
混勻,靜置10min后,290nm處記錄測定管吸光值A1和對照管吸光值A2,△A=A1-A2。
注意:對照管只要做一管
PAL活性計算
(1)按蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個酶
活性單位。
PAL(U/mg prot)= A V反總 (Cpr V樣) 0.1 T =17.3 A Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位定義:每g組織每mL反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個酶活性單位。
PAL(U/g鮮重)= A V反總 (W V樣 V樣總) 0.1 T =17.3 A W
V反總:反應體系總體積,1.04mL;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液
體積,1 mL;T:反應時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;
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