大鼠干擾素-r（IFN-r）定量EIA試劑盒使用說明

原理
本實(shí)驗(yàn)采用ABC-HRP方法。用抗大鼠IFN-r單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IFN-r與單抗結(jié)合，高靈敏檢測(cè)樣品中IFN-r的含量。
試劑盒組成
1. 48孔微孔板： 一塊
2. 樣品稀釋液：一瓶 6ml
3. 抗體工作液：一瓶 4ml
4. 酶標(biāo)抗體工作液： 一瓶 6ml
5. 終止液：一瓶 6ml
6. 洗滌液（25 x）：一瓶 25ml
7. 標(biāo)準(zhǔn)品：一管/二管 用前加樣品稀釋液250ul溶解，溶解后4度可保存一周
8. 底物液A：一瓶 6ml
9. 底物液B：一瓶 6ml
10. 坐標(biāo)紙： 一張
11. 封板紙 一張
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1. 洗滌液：用重蒸水1:25稀釋
2. 收集血液標(biāo)本：采集血清盡早檢測(cè)，2-8oC保存一天；需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 oC）保存，避免反復(fù)凍融。
檢測(cè)程序
1. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔，每孔中各加入樣品稀釋液100ul，孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul，混勻后用加樣器吸出100ul，移至第二孔。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋至第六孔，*后，從第六孔中吸出100ul棄去。第七孔為空白對(duì)照，第八孔為零孔。
2. 加樣：待測(cè)品孔每孔各加入待測(cè)樣品100ul混勻。
3. 將反應(yīng)板充分混勻后粘上封板紙置37 oC 120分鐘。
4. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。
5. 每孔（除零孔）加抗體工作液50ul，置37℃ 60分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔（除零孔）加酶標(biāo)抗體工作液100ul（兩滴），將反應(yīng)板置37 oC 60分鐘。
8. 洗板：同前。
9. 每孔加入底物液A、B各一滴，置37 oC避光反應(yīng)15分鐘。
10. 每孔加入1滴終止液混勻。
11. 在450nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1. 所有OD值都應(yīng)減除零孔值后再行計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品500、250、125、62.5、31.3、15.6、0 pg/ml之OD值在雙對(duì)數(shù)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過標(biāo)本的OD值可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度?；蚴褂糜?jì)算機(jī)軟件，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品含量。
注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待查樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。有效期6個(gè)月。4. 本試劑盒含2M硫酸，
5. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
6. 本試劑盒僅供研究用。
 

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