安捷倫高效液相色譜儀操作說明

一、校槍及樣品處理

1.校槍

儀器：兩個小燒杯、分析天平、移液槍1000μL、100μL

步驟：打開分析天平預(yù)熱，一只燒杯放到稱量盤上調(diào)零，一只裝入純水。將移液槍1000μL、100μL調(diào)至950μL、50μL，分別吸取純水稱質(zhì)量，如偏大或偏小，調(diào)節(jié)移液槍直至準確到0.001g。（如槍使用過久或氣密性不好，可以準備一個小燒杯裝入純水，每次先輕輕沾濕槍口，甩掉水或在用衛(wèi)生紙吸取口上的水，再插上槍頭使用。）注意慢吸慢放，不要掛珠。

2.樣品處理：用1.5mL離心管取0.5mL發(fā)酵液，取出樣品后，首現(xiàn)在離心機上離心（13000rap/min3min）。然后將樣品稀釋20倍，取950μL純水、50μL發(fā)酵液于離心管中。混勻后在離心機上離心（13000rap/min3min）。準備自動進樣瓶（瓶中放上內(nèi)襯管），取200μL待測液蓋緊蓋子。按順序放到自動進樣盤中。

二、開機

1、儀器各組件

將在線脫氣器、泵：四元、進樣器：自動進樣器（六通閥）、柱溫箱、檢測器：示差折光檢測器開關(guān)打開。打開計算機，進入WindowsXP畫面，并運行CACServer程序，打開色譜儀各組件電源，待顯示已聯(lián)上各組件的信息及各模塊自檢完成后，雙擊Instrument1Online，圖標(biāo)打開工作站?；瘜W(xué)工作站自動與1200LC通訊。

流動相:

將流動相（一般不主張使用偏酸、偏堿的流動相）放入溶劑瓶中，打開沖洗閥，設(shè)流速為2ml/min，單擊確定，再依次單擊泵→控制，選中啟動，單擊確定，則系統(tǒng)開始沖洗，至管路無氣泡為止，切換管路反復(fù)操作至所需管路均無氣泡。在“控制”選項中選“關(guān)閉”，關(guān)閉泵，關(guān)閉沖洗閥。單擊泵下面瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實際體積和瓶體積。每次四元泵開始前，要打開沖洗閥閥門以5ml/min的流速沖洗10分鐘，使脫氣機與泵之間的流動相從沖洗閥流出，以免隔夜的流動相損傷色譜柱。

每次進樣檢測前，要用流動相沖洗色譜柱30分鐘，達到柱溫前20min流速設(shè)為0.2ml/min，達柱溫后再改為0.6ml/min。待1—1.5h檢測器的基線穩(wěn)定方可進行進樣檢測；檢測結(jié)束后，色譜柱要先用水沖洗20分鐘，然后用甲醇或乙腈沖洗至少20分鐘，以延長色譜柱的使用壽命。絕對禁止偏酸、偏堿的流動相以及緩沖液在色譜柱中過夜。

三、編輯分析方法

新方法建立：

程序菜單顯示綠色，即可進行參數(shù)設(shè)置及操作

泵參數(shù)設(shè)定：設(shè)定流速、比例、運行時間、平衡時間、泵輔助設(shè)定（梯度）等。點擊確定進入下一畫面

自動進樣器參數(shù)設(shè)定：設(shè)定進樣量（5μL）、抽取位置（調(diào)節(jié)針高度3.0mm）、進樣方式等?！靶蛄小薄蛄袇?shù)→子目錄（日期：年月日時間）

“序列表”：插入/批量輸入向?qū)А白芳印薄ⅰ安迦搿薄皹悠肺恢谩?、“開始位置”、“增量”、“插入行數(shù)”

標(biāo)準進樣：只能輸入進樣體積，此方式無洗針功能。

抽取位置：3.0mm

洗針進樣：可以輸入進樣體積和洗瓶位置此方式針從樣品瓶抽完樣品后會在洗瓶中洗針。柱溫箱參數(shù)設(shè)定：測定時75℃，反沖時80℃。（在”溫度”下面的方框內(nèi)輸入所需溫度，并選中它，點擊”更多 ”鍵，選中“與左側(cè)相同”使柱溫箱的溫度左右一致，點擊“確定”進入下一界面。

檢測器參數(shù)設(shè)定－示差參比池

沖洗：10min（校零）。不需要每次都沖洗。溫度設(shè)置50℃（不要設(shè)很高，與檢測器溫度相當(dāng)即可）

選中點擊確定進入下一畫面

方法保存：單擊方法另存為輸入一—方法名，如test單擊確認

選擇已有方法：點擊【Method】，點擊【Loadmethod】選項，選取已存的各種操作方法。

四、樣品分析與采集數(shù)據(jù)將樣品放于樣品盤中相應(yīng)位置，所有的樣品均需澄清。

“序列”→“序列參數(shù)”：按照自動進樣盤上的樣品瓶的順序編寫參數(shù)（樣品瓶位置、名稱、方法）。

待儀器顯示Ready，基線平穩(wěn)，從【Runcontrol】菜單中選擇【RunMethod】，開始進樣分析?；螯c擊“開始”開始進樣分析。

數(shù)據(jù)處理：單擊【View】菜單，單擊【Dataanalysis】選項，進行數(shù)據(jù)分析。單擊【View】菜單，單擊【MethodandRuncontrol】選項，回到樣品分析界面。

數(shù)據(jù)分析方法編輯

從File菜單選擇Loadsignal選中您的數(shù)據(jù)文件名，單擊Ok

積分：從“積分”中選擇“積分”，如積分結(jié)果不理想，再從菜單中選擇“積分事件”選項選擇合適的斜率靈敏度、峰寬、最小峰面積、最小峰高

從積分菜單中選擇積分選項則數(shù)據(jù)被積分

如積分結(jié)果不理想則修改相應(yīng)的積分參數(shù)直到滿意為止

單擊左邊圖標(biāo)將積分參數(shù)存入方法

五、標(biāo)準曲線的繪制

1.稱取葡萄糖、果糖、蔗糖（恒重）各1g準確到0.0001g，稀釋到1000mL容量瓶中。

2.將標(biāo)準溶液搖勻，用離心管取糖標(biāo)液，準備自動進樣瓶（瓶中放上內(nèi)襯管），取200μL待測液蓋緊蓋子。

3.設(shè)置：將樣品放于樣品盤中相應(yīng)位置，所有的樣品均需澄清。

“序列”→“序列參數(shù)”：按照自動進樣盤上的樣品瓶的順序編寫參數(shù)（樣品瓶位置、名稱、方法、進樣量:相應(yīng)成梯度的量）。用濃度和峰面積回歸，就得到了標(biāo)準曲線

六、關(guān)機

沖洗系統(tǒng)：反相柱用10％的甲醇水沖洗系統(tǒng)30分鐘，再用100％甲醇沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后關(guān)泵，正相柱先用合適溶劑沖洗，后用柱保存液沖洗。退出工作站，關(guān)閉計算機。關(guān)閉10％異丙醇溶液控制閥。關(guān)閉儀器各組件，關(guān)掉電源開關(guān)。

安捷倫高效液相色譜儀

安捷倫高效液相色譜儀使用注意事項

1、色譜柱使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等;必須使用保護柱;色譜柱長時間不用時，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死保存。

2、流動相使用前必須過濾，不要使用多日存放的蒸餾水(易長菌)

3、溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌。

4、檢測器的燈有使用壽命限制，一般在正式進樣分析前30min左右開啟D燈或W燈，分析結(jié)束，立即關(guān)燈。5、儀器運行時，泵頭必須用10%異丙醇水溶液虹吸沖洗，不能干涸。

6、注意各流動相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于最低限會自動停泵。

7、對于手動進樣器當(dāng)使用緩沖溶液時要用水沖洗進樣口同時搬動進樣閥數(shù)次每次數(shù)毫升

8、若使用含鹽流動相，開機時必須先用10%甲醇水溶液沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相。

9、使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D(進液口位于混合器下方)放置含鹽流動相，B、C(進液口位于混合器上方)放置不含鹽流動相。