我的就一言難盡呢
養(yǎng)出漂亮細(xì)胞 這個(gè)事兒本就說(shuō)來(lái)話長(zhǎng)~
前幾期話題,我們給大家講過(guò)
細(xì)胞貼壁、老化、成團(tuán)、
凍存、復(fù)蘇、污染等問(wèn)題 。
這次小編又整理了一遍,
先看看這些基本點(diǎn)是否都做好了
1. 細(xì)胞剛拿到手最好先做一下支原體檢測(cè),發(fā)現(xiàn)有污染迅速處理掉。
2. 嚴(yán)格無(wú)菌操作,BI也提供Pharmacidal噴壺,有效預(yù)防真菌(和孢子),細(xì)菌(和孢子),支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長(zhǎng)和污染。
3. 真的不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套!
4. 水浴鍋很臟,可用BI Aquaguard-1 消毒水盤,效果非常好。
5. 最好是同一時(shí)間只有一個(gè)人在細(xì)胞房養(yǎng)細(xì)胞。
用好培養(yǎng)基和血清
1. 養(yǎng)細(xì)胞之前,就要先了解細(xì)胞的來(lái)源、種類、名稱,查閱一定量的文獻(xiàn),確定所需培養(yǎng)基種類及是否需要添加特殊成分。
2. 血清主要功能是補(bǔ)充細(xì)胞生長(zhǎng)因子,提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、不同細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子的要求也不一樣。血清替代物取代血清補(bǔ)充生長(zhǎng)因子和蛋白質(zhì),但不一定是最適合細(xì)胞的,因此使用時(shí)要注意,避免引起細(xì)胞分化或老化。
3. 這里我們順便說(shuō)一下常見的血清沉淀:血清沉淀是血清纖維的凝集,不影響細(xì)胞生長(zhǎng),不必驚慌!我們建議2000rpm離心5min取上清即可,并不影響血清質(zhì)量。
4. 如果細(xì)胞活力差,可增加血清濃度到20%, 給細(xì)胞較多的生長(zhǎng)因子,等細(xì)胞長(zhǎng)起來(lái)再降回原來(lái)的濃度。
了解細(xì)胞生長(zhǎng)習(xí)性
不同的細(xì)胞生長(zhǎng)習(xí)性不同,了解細(xì)胞生長(zhǎng)習(xí)性,正確計(jì)數(shù),才能掌握好傳代密度。對(duì)于一般細(xì)胞株,控制在三天一傳,是比較合適的,細(xì)胞不會(huì)太擠也不會(huì)太寂寞。但例如癌細(xì)胞,一發(fā)起瘋來(lái)半天就可以傳代,不及時(shí)換液或擴(kuò)增分分鐘會(huì)餓死或擠死。
所以剛開始接觸一款細(xì)胞,要勤觀察,及時(shí)掌握它的生長(zhǎng)情況。掌握細(xì)胞的生長(zhǎng)節(jié)奏之后可以變成一天一看或兩天三看,畢竟太頻繁的把它從培養(yǎng)箱里拿出來(lái)也不太好。
消化一定程度上是對(duì)細(xì)胞的一種折磨,在使用胰酶(Trypsins)細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差,做流式時(shí)的CD Marker 也可能會(huì)下降。
對(duì)大部分細(xì)胞消化來(lái)說(shuō),可以在消化到差不多快要脫落的時(shí)候,移除大部分胰酶,然后直接加新鮮的培養(yǎng)基將細(xì)胞吹打下來(lái),省去離心步驟。殘余的胰酶含量很低,所以不會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生任何影響。
對(duì)于難消化的細(xì)胞,如HCT15, LS411和KM12,用不含Ca2+、Mg2+的PBS洗滌一次后,加入稍微多一點(diǎn)胰酶,置37 C徹底消化(一般為幾分鐘)至脫落(一晃細(xì)胞就掉下來(lái)),然后再加含血清的培養(yǎng)基終止胰酶反應(yīng)、離心 (若是無(wú)血清培養(yǎng)基,需改加胰酶抑制劑)。這么做的道理是,細(xì)胞消化不徹底,勢(shì)必會(huì)增加吹打輔助脫落的次數(shù),而吹打次數(shù)越多,細(xì)胞活性越差。
一般,生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài),那么采用塑料瓶會(huì)比玻璃瓶的效果好;生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞,用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會(huì)更好。因此,對(duì)于同一種細(xì)胞,在其生長(zhǎng)速度慢的時(shí)候(比如細(xì)胞剛復(fù)蘇時(shí)或者原代培養(yǎng)),塑料瓶會(huì)好一點(diǎn);而在其生長(zhǎng)旺盛的時(shí)候,玻璃瓶則相對(duì)會(huì)好一點(diǎn)。
細(xì)胞嬌弱,想要成功地養(yǎng)好細(xì)胞,需要時(shí)刻惦記它,及時(shí)觀察,出現(xiàn)意外,及時(shí)處理,才能收獲一盤漂亮的細(xì)胞。若仍有疑問(wèn),建議回顧往期文章或聯(lián)系我們
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