▲ 全球平均有約15~35%細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室發(fā)生支原體污染（65~80%嚴(yán)重污染），超過一半實(shí)驗(yàn)室有兩種支原體污染；而全球各地的細(xì)胞庫中，也有發(fā)現(xiàn)5~35%不等的支原體感染率，日本甚至高達(dá)60%。

但！全球目前有在做常規(guī)支原體監(jiān)控的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室卻不到50%！ 

支原體為細(xì)菌的一類，最早在1898年由法國 E. Nocard 及 E.R.Roux 從肺疫牛隻中分離出來，1956年才正式命名為支原體 (Mycoplasma)；支原體大小介于細(xì)菌與病毒之間 (直徑介于0.15-0.3 m)，為目前發(fā)現(xiàn)最小最簡單的原核微生物，唯一可見的胞器是核糖體，沒有細(xì)胞壁，只有三層結(jié)構(gòu)的細(xì)胞膜 (下圖1)，所以呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀，分枝狀等多種態(tài) (下圖2)。
▲ 圖1：支原體結(jié)構(gòu)圖

▲圖2：支原體的各種形態(tài) 大多支原體基因組只有0.58－1.38百萬堿基，這使得它的生物合成能力薄弱，必須利用本身細(xì)胞膜表面高密度的黏附素附著于宿主細(xì)胞表面，并交換宿主的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜成分，來獲取增殖需要的物質(zhì)。但由于支原體生長條件復(fù)雜，使得菌體培養(yǎng)困難重重，導(dǎo)致過去支原體一直不受關(guān)注；近幾年，拜分子生物學(xué)與基因組學(xué)的進(jìn)步所賜，基因構(gòu)造簡單的支原體已引起了較為廣大注意。
  敵人清單實(shí)驗(yàn)室污染種類

至今，共有超過180種支原體被發(fā)現(xiàn)，有超過20種能感染體外培養(yǎng)的細(xì)胞，而目前實(shí)驗(yàn)室最常見(95% 以上)的支原體則來自其中6種：

源自于實(shí)驗(yàn)人員鼻腔、口腔，并經(jīng)由飛沫傳至培養(yǎng)細(xì)胞中的口腔支原體（M.orale）、豬鼻支原體（M.fermentans）及人型支原體（M.hominis），居于首位（占總體的50%以上）。

其次則為大多來自牛血清的精氨酸支原體（M. Arginini）、萊氏無膽甾支原體（A. Laidlawii）、及來自豬源胰酶的豬鼻支原體（M. Hyorhinis）。
PS：BI胰酶經(jīng)過輻照，不含活的支原體。
 

可惡的東西支原體 麻煩精

既然支原體是細(xì)菌的一種，抗生素一加不就好了嗎? 
為什么可以搞到全球這么多細(xì)胞庫污染?

支原體體積非常小, 極易通過0.22um濾膜, 且一般光學(xué)顯微鏡無法觀察到。                                      支原體能附著并存活在器物表面(操作臺, 培養(yǎng)箱,顯微鏡等), 提高操作污染概率。                              支原體生長緩慢，通常不破壞宿主細(xì)胞但默默改變了細(xì)胞生長代謝，且對傳統(tǒng)抗生素具抗性，因?yàn)榭股卮蠖嗥茐募?xì)菌細(xì)胞壁, 而支原體恰恰沒有細(xì)胞壁。                                    支原體污染初期, 培養(yǎng)基不變色, 細(xì)胞形態(tài)正常，但等大量污染時(shí), 為時(shí)已晚, 耗時(shí)又耗力。
■微生物培養(yǎng)法
將樣品培養(yǎng)在特殊瓊脂培養(yǎng)基上，在37 C有氧環(huán)境中孵育2周，陽性培養(yǎng)基上會長出100~400um大小的 煎蛋狀 菌落。
■DNA螢光染色法
支原體DNA中A-T含量占多數(shù)（55～80%），容易被Hoechst 33258此熒光劑染上，被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后，在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點(diǎn)。
■ELISA法
將支原體16S核糖體RNA標(biāo)上標(biāo)簽，然后用特定抗體預(yù)包被過的微孔板對標(biāo)簽進(jìn)行捕獲，再加入顯色用的抗體及底物，最后通過比色法得出檢測結(jié)果。
■PCR法
原理為擴(kuò)增支原體16S核糖體RNA的基因，能檢測多達(dá)19種支原體，操作快速、準(zhǔn)確性高，市面上有多款相關(guān)產(chǎn)品可參考 (BI：EZ-PCR支原體檢測試劑盒)。
 

看我妙招
怎么消滅 小三
■免疫法：使用支原體特異性抗血清、裸鼠傳代法
■化學(xué)法：界面活性劑處理（BI：Pharmacidal 支原體噴壺）
■生化法：使用抗生素等藥物（BI：BIOMYC 支原體處理試劑）

目前，大環(huán)內(nèi)酯（Macrolides）、四環(huán)素（Tetracyclines）和喹諾酮（Quinolones）這三類抗生素，是公認(rèn)對抗支原體效果最佳的藥物，而市面上有許多針對不同菌株配置的抗生素產(chǎn)品可以參考。

如果你的細(xì)胞檢測結(jié)果為～

＂無支原體污染＂ 那恭喜你啦！要好好維持！
  要怎么預(yù)防支原體污染?

培養(yǎng)良好的無菌操作實(shí)驗(yàn)習(xí)慣
感冒咳嗽時(shí)盡量不要使用細(xì)胞房，如果必須使用，請?jiān)趯?shí)驗(yàn)后徹底清潔消毒使用空間。

新購產(chǎn)品檢測
新購買血清等動物源產(chǎn)品、細(xì)胞株等，在使用前先做支原體檢測；或從有資質(zhì)的正規(guī)廠商購買相關(guān)產(chǎn)品。（上海逍鵬生物-以色列BI細(xì)胞培養(yǎng)試劑）

常規(guī)工作要落實(shí)
定期檢測使用中的細(xì)胞，定期擦拭、清潔實(shí)驗(yàn)室環(huán)境（BI：Pharmacidal 支原體噴壺）。

最小化抗生素使用頻率
非珍貴細(xì)胞污染，請直接丟棄，避免抗生素濫用導(dǎo)致抗藥性產(chǎn)生

Nikfarjam Laleh, Farzaneh Parvaneh. Preventionand Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Culture. Cell J. 2012.

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