細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中碰到的小黑點(diǎn)，到底是什么呢？（附建議）

讓我們先來(lái)看看細(xì)胞遭受小黑點(diǎn)入侵后的災(zāi)難現(xiàn)場(chǎng)

小黑點(diǎn)之所以這么令人頭痛，是由于它的數(shù)量會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加而不斷增加，當(dāng)數(shù)量多到一定程度的時(shí)候，就會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)造成一定的影響，嚴(yán)重影響科研的進(jìn)展。在顯微鏡下觀察時(shí)往往表現(xiàn)為沒(méi)有光澤，體積較小的黑色顆粒。小編這邊結(jié)合自己多年細(xì)胞培養(yǎng)的經(jīng)歷和接觸到的客戶案例，跟大家分享下培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)程中碰到過(guò)的小黑點(diǎn)。

1、細(xì)胞碎片

化學(xué)或者物理的強(qiáng)烈刺激（例如胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，吹打細(xì)胞太過(guò)用力等）往往會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，產(chǎn)生很多的細(xì)胞碎片。在顯微鏡下進(jìn)行觀察時(shí)，可以看到很多呈不規(guī)則形態(tài)、沒(méi)有光澤的顆粒粘附在細(xì)胞培養(yǎng)皿的底部。

建議：狀態(tài)不好的細(xì)胞往往貼壁能力較強(qiáng)，因此切勿用移液器進(jìn)行強(qiáng)力的吹打，從而損害了健康的細(xì)胞；另外，控制好胰酶消化的時(shí)間，只需保證大部分正常的細(xì)胞被消化下來(lái)就可以了，然后更換新的細(xì)胞培養(yǎng)皿。

2、凋亡小體

體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞很容易受到培養(yǎng)環(huán)境因素的影響，例如營(yíng)養(yǎng)成分的改變、氧的供給、毒素、細(xì)胞代謝產(chǎn)物的積累、pH、 剪切力、細(xì)胞密度及微生物污染等。這些環(huán)境的改變都有可能誘發(fā)細(xì)胞的凋亡，從而產(chǎn)生很多分泌的凋亡小體。凋亡小體大多游離在培養(yǎng)基中，但也有一些會(huì)通過(guò)暴露的核酸彼此之間相互黏連，從而形成一個(gè)棕色的凋亡小體團(tuán)塊，沒(méi)有細(xì)胞光澤。

建議：細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中一定要控制細(xì)胞傳代的時(shí)間，不能讓細(xì)胞 長(zhǎng)過(guò) ；不要使用過(guò)酸或者過(guò)堿的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；選用內(nèi)毒素含量較低的血清。

3、血清中的沉淀

磷酸鈣是常見(jiàn)的一種沉淀物，通常會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。

建議：經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著增多，對(duì)于大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要進(jìn)過(guò)高溫滅活處理的。

4、黑膠蟲(chóng)

對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的小黑點(diǎn)到底是什么，目前呼聲zui高的非黑膠蟲(chóng)莫屬，但是小編查看了很多的資料，依舊不知道其為何方神圣。有人認(rèn)為是從血清中來(lái)的一種原蟲(chóng)，有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白結(jié)晶，因此消滅黑膠蟲(chóng)的方式也是各式各樣。

建議：如果污染的細(xì)胞數(shù)量不是很多，建議直接丟棄，或者重新復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

5、支原體污染

黑膠蟲(chóng)的污染很難定性，大部分被黑膠蟲(chóng)污染的細(xì)胞都存在生長(zhǎng)遲緩，培養(yǎng)基顏色沒(méi)有明顯改變的現(xiàn)象，更像是受到了支原體的污染。已有通過(guò)使用支原體去除試劑解決黑膠蟲(chóng)污染困擾的成功案例，為此Yeasen公司特別研發(fā)了針對(duì)支原體污染的一系列產(chǎn)品，包括支原體的檢測(cè)，支原體去除，以及去除后防止支原體再度感染的支原體預(yù)防試劑。（往下看 ）

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編碼

規(guī)格

價(jià)格

檢測(cè)

MycAwayTM  Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測(cè)試劑盒

40611ES

25/60

5/25/100 T

467/1537

GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit

GMyc-PCR支原體檢測(cè)試劑盒

40601ES

10/20

10/20 assay

327/557

去除

MycAwayTM Treatment (1000 )-Mycoplasma Elimination Reagent

MycAwayTM 支原體去除試劑（1000 ）

40607ES

01/03/08

0.1/1/5 5 ml

168/467/1357

預(yù)防

Mycoplasma Prevention Reagent

MycAwayTM 支原體預(yù)防試劑（2000 ）

40608ES

03/08

1/5 1ml

387/1257

MycAwayTM  Spray (Ready-to-use)

支原體噴霧劑（即用型）

40605ES

02/03/08

1/2/10 500 ml

237/407/1617

MycGuardTM-1 Solution (100 ), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator  

細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤(pán)1號(hào)消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防）

40609ES60

100 ml

247

MycGuardTM-2 Solution (500 ), for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴鍋2號(hào)消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防）

40610ES

100 ml

237

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