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表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究是近幾年來(lái)生物學(xué)科里最熱門(mén)的研究領(lǐng)域之一，目前已知的天然RNA修飾類(lèi)型超過(guò)150種，其中RNA甲基化的占比超過(guò)60%，之前我們已經(jīng)介紹很多關(guān)于m6A、m5C和m1A的相關(guān)內(nèi)容，今天為大家介紹一種新的RNA甲基化修飾----m7G。
m7G作為表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究中一顆耀眼的新星，受到眾多科研工作者的追捧。目前已有的研究表明，m7G RNA甲基化修飾存在于各類(lèi)分子中，包括：mRNA 5 帽子結(jié)構(gòu)、mRNA內(nèi)部、pri-miRNA、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA（tRNA）和核糖體RNA（rRNA）。m7G RNA甲基化修飾能夠調(diào)節(jié)mRNA的轉(zhuǎn)錄、miRNA的生物合成和生物學(xué)功能、tRNA穩(wěn)定性、18S rRNA的核內(nèi)加工及成熟。m7G RNA甲基化是在甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下，使RNA鳥(niǎo)嘌呤（G）的第七位N上加上甲基的一種修飾（N7-methyladenosine，m7G）。m7G RNA甲基化修飾作為一類(lèi)新型RNA甲基化，近兩年高分文章不斷，是繼m6A修飾之后的又一表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)熱點(diǎn)。今天為大家介紹一篇m7G甲基化通過(guò)促進(jìn)miRNA let-7的成熟，從而抑制肺癌細(xì)胞遷移的文章。
原文鏈接：METTL1 Promotes let-7 MicroRNA Processing via m7G Methylation
發(fā)表期刊：Molecular Cell
影響因子：14.548
實(shí)驗(yàn)方法：m7G MeRIP seq、m7G MeRIP qPCR、RNA-seq等 文章內(nèi)容
1. 肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549特異性miRNA中m7G的檢測(cè)
作者用抗體富集法m7G MeRIP seq（云序提供此服務(wù)）鑒定肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中含有m7G的成熟miRNA。挑選其中高度富集的miRNA進(jìn)行MeRIP-qPCR（云序提供此服務(wù)）驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)其中五個(gè)miRNA確實(shí)存在m7G修飾。
前期研究發(fā)現(xiàn)RNA甲基化酶METTL1介導(dǎo)tRNA的m7G修飾，于是作者開(kāi)始研究METTL1對(duì)前面鑒定到的miRNA（如let-7e-5p）的m7G修飾的影響。在A549細(xì)胞中敲除METTL1，發(fā)現(xiàn)m7G甲基化修飾下調(diào)的miRNA比上調(diào)或不變的miRNA多，并且這種下調(diào)可以通過(guò)回補(bǔ)METTL1的表達(dá)來(lái)挽救。 圖1 A549細(xì)胞特異性miRNA中m7G的檢測(cè) 2.METTL1抑制A549細(xì)胞的遷移
METTL1敲除后，m7G甲基化修飾下調(diào)的miRNA大部分與細(xì)胞遷移功能相關(guān)，因此作者推測(cè)METTL1可能通過(guò)調(diào)控miRNA（包括let-7家族）影響細(xì)胞遷移功能。為了探索這種可能性，作者首先測(cè)試了METTL1是否影響A549細(xì)胞的遷移。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，敲除METTL1可明顯增加A549遷移能力，但不影響細(xì)胞增殖。后期作者又進(jìn)行回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)回補(bǔ)METTL1后細(xì)胞遷移能力下降。 圖2 敲除METTL1促進(jìn)細(xì)胞遷移 上述結(jié)果表明，METTL1可能通過(guò)調(diào)控miRNA的m7G甲基化影響細(xì)胞遷移，為了進(jìn)一步探索這一可能性，作者進(jìn)行RNA-seq（云序提供此服務(wù)）分析，以確定METTL1敲降前后對(duì)基因表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)了254個(gè)上調(diào)和60個(gè)下調(diào)的基因。KEGG分析發(fā)現(xiàn)表達(dá)上調(diào)的基因多數(shù)參與細(xì)胞遷移途徑，這與METTL1敲除后的細(xì)胞表型一致。隨后作者調(diào)查了METTL1調(diào)節(jié)的基因是否也是m7G修飾的miRNA的靶點(diǎn)，結(jié)果驗(yàn)證確實(shí)如此，上述結(jié)果表明METTL1通過(guò)調(diào)控miRNA的m7G修飾，進(jìn)而影響其靶基因表達(dá)，從而改變細(xì)胞遷移能力。 圖3 METTL1通過(guò)影響miRNA靶基因表達(dá)發(fā)揮功能 3.METTL1 通過(guò)let-7調(diào)節(jié)HMGA2的表達(dá)
為了研究METTL1敲降后，差異表達(dá)的基因與m7G修飾的miRNA之間的關(guān)系，作者挑選了HMGA2進(jìn)行進(jìn)一步研究，它是METTL1敲降后上調(diào)明顯的基因之一，其3 UTR區(qū)顯著富集了幾個(gè)含有m7G的miRNA的結(jié)合位點(diǎn)，包括let-7（5p）、miR-125（5p）和miR-92（3p）。
首先，作者證實(shí)METTL1基因敲除可增加細(xì)胞中HMGA2的mRNA表達(dá)和蛋白質(zhì)水平。接著作者通過(guò)熒光素酶實(shí)驗(yàn)，證實(shí)METTL1通過(guò)3 UTR對(duì)HMGA2的表達(dá)產(chǎn)生影響。為了證實(shí)METTL1對(duì)HMGA2的3 UTR的調(diào)節(jié)是通過(guò)miRNA的作用介導(dǎo)的，作者重點(diǎn)了研究含有m7G甲基化修飾的let-7，它在HMGA2的3 UTR中有7個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，刪除let-7種子序列后，兩者無(wú)法結(jié)合，熒光素酶活性增加，并且METTL1失去對(duì)HMGA2的調(diào)節(jié)作用。隨后作者做回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，METTL1敲降引起的HMGA2蛋白的上調(diào)，可以通過(guò)回補(bǔ)成熟let-7e-5p miRNA進(jìn)降低。這些數(shù)據(jù)證實(shí)METTL1確實(shí)通過(guò)let-7調(diào)節(jié)HMGA2的表達(dá)。 圖4 METTL1 通過(guò)let-7調(diào)節(jié)HMGA2的表達(dá) 4. METTL1直接修飾let-7e pri-miRNA并調(diào)節(jié)其加工過(guò)程
那么問(wèn)題來(lái)了，METTL1是如何影響let-7的呢？作者通過(guò)紫外交聯(lián)和免疫沉淀（CLIP）證實(shí)METTL1直接結(jié)合到miRNA的前體，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)METTL1影響miRNA（如let-7e-5p）成熟體的表達(dá)（非miRNA前體），并排除METTL1對(duì)剪接因子的影響。接下來(lái)通過(guò)RIP實(shí)驗(yàn)、體外剪接和甲基化轉(zhuǎn)移酶活性實(shí)驗(yàn)等研究發(fā)現(xiàn)METTL1對(duì)miRNA（如let-7e-5p）成熟的影響是直接的、且依賴于m7G修飾的。 圖5 METTL1直接修飾let-7e pri-miRNA并調(diào)節(jié)其加工過(guò)程 5. G-四聯(lián)體標(biāo)記標(biāo)記m7G修飾的miRNA
為了探討let-7e的m7G甲基化如何影響其體內(nèi)加工的機(jī)制，作者通過(guò)靶向質(zhì)譜確定let-7e-5p中m7G修飾的位點(diǎn)實(shí)G11。生信分析發(fā)現(xiàn)G11所在位置是GG-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)（G-quadruplex，G2+N4G2+N4G2+N4G2+），為了探討G-四聯(lián)體與m7G之間的聯(lián)系，作者分析了含有m7G的miRNA的堿基組成，評(píng)估了G-四聯(lián)體基序的潛在富集，發(fā)現(xiàn)G四元結(jié)構(gòu)在METTL1影響的發(fā)生m7G修飾的miRNA中都存在。 圖6 G-四聯(lián)體標(biāo)記 m7G修飾的miRNA 6.m7G修飾位點(diǎn)影響G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)莖環(huán)平衡且促進(jìn)miRNA加工
那么G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)與m7G修飾的關(guān)系是怎樣的？作者進(jìn)一步通過(guò)圓二色譜、變性實(shí)驗(yàn)和序列突變等實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。結(jié)果觀察到，G11突變通過(guò)將結(jié)構(gòu)平衡轉(zhuǎn)移到典型的莖環(huán)結(jié)構(gòu)來(lái)影響pri-let-7e的折疊。相比之下，G4和G5突變對(duì)結(jié)構(gòu)平衡沒(méi)有明顯影響。這些結(jié)果表明，G11的甲基化有不利于let-7e的莖環(huán)結(jié)構(gòu)平衡。
接下來(lái)，作者使用含DAG的pri-let-7e發(fā)夾寡核苷酸來(lái)確定誘導(dǎo)的結(jié)構(gòu)變化是否影響體內(nèi)miRNA的加工，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在G11處的pri-let-7e甲基化通過(guò)破壞局部G-四鏈結(jié)構(gòu)促進(jìn)其加工。 圖7 m7G修飾位點(diǎn)影響G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)莖環(huán)平衡且促進(jìn)miRNA加工 總結(jié)
作者首先通過(guò)m7G MeRIP seq找到肺癌細(xì)胞系中特異性的發(fā)生m7G修飾的miRNA，并對(duì)其驗(yàn)證。隨后作者發(fā)現(xiàn)METTL1甲基化酶介導(dǎo)的m7G通過(guò)破壞G-四聯(lián)體影響莖環(huán)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，從而促進(jìn)其從pri-到pre-miRNA的過(guò)程，最終導(dǎo)致miRNA成熟。成熟的miRNA通過(guò)結(jié)合下游靶基因，抑制細(xì)胞遷移，從而抑制肺癌。
圖8 m7G在miRNA生物合成中的作用 云序生物m7G RNA甲基化測(cè)序技術(shù)服務(wù)
云序生物提供兩種m7G RNA甲基化測(cè)序服務(wù)：（1）m7G RNA甲基化單堿基測(cè)序，可對(duì)m7G修飾進(jìn)行高通量檢測(cè)和單堿基定位；（2）MeRIP測(cè)序，可通過(guò)m7G特異性抗體，抓取有甲基化修飾的片段進(jìn)行測(cè)序，對(duì)m7G修飾進(jìn)行高通量測(cè)序和peak峰定位。此外，云序生物針對(duì)m7G RNA甲基化開(kāi)發(fā)了多款產(chǎn)品，可實(shí)現(xiàn)對(duì)mRNA、LncRNA、pri-miRNA、tRNA和rRNA等多類(lèi)RNA分子的m7G甲基化修飾水平的全面檢測(cè)。
m7G RNA甲基化單堿基測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程圖
m7G MeRIP測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程圖 樣本要求
樣品類(lèi)型
細(xì)胞、組織或RNA，其他樣本類(lèi)型請(qǐng)電詢。
樣品量
1.單堿基測(cè)序方式：
a) 細(xì)胞： 1 108
b) 組織：500 mg - 5 g
c) RNA：100 g - 300 g
2. MeRIP測(cè)序方式：
a) 細(xì)胞： 2 107
b) 組織：100 mg - 1g
c) RNA：30 g - 300 g
d) 超微量RNA滿足500 ng - 30 g 樣品運(yùn)輸及保存
樣品運(yùn)輸：樣品置于1.5mL離心管中，封口膜封好，干冰運(yùn)輸。
樣品保存：細(xì)胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護(hù)劑處理，液氮凍存后-80℃保存；RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中，-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
云序優(yōu)勢(shì)
單堿基分辨
可對(duì)m7G甲基化修飾進(jìn)行單堿基定位。
高通量檢測(cè)
可對(duì)全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)的m7G位點(diǎn)進(jìn)行高通量地平行檢測(cè)。
全分子覆蓋
可全面地對(duì)mRNA、lncRNA、pri-miRNA、tRNA和rRNA等多類(lèi)RNA分子的m7G位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。
一站式服務(wù)
客戶僅需提供組織或細(xì)胞，云序生物一站式完成RNA抽提，樣品預(yù)處理，建庫(kù)，測(cè)序，數(shù)據(jù)分析全套流程。
專(zhuān)業(yè)的生物信息學(xué)分析
專(zhuān)業(yè)的生物信息學(xué)團(tuán)隊(duì)，能夠滿足客戶的各類(lèi)深入數(shù)據(jù)分析需求
云序生物RNA表觀修飾
云序作為一家依托于高通量測(cè)序的表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)科研服務(wù)公司，長(zhǎng)期致力于提供優(yōu)質(zhì)前沿表觀研究測(cè)序產(chǎn)品，繼m6A、m5C、m1A之后，云序隆重推出多款RNA新修飾，不僅m7G測(cè)序，還包括m3C測(cè)序、ac4C RNA乙?；瘻y(cè)序、2 -O-甲基化RNA測(cè)序產(chǎn)品，打造了全面的RNA修飾研究平臺(tái)。 云序，您身邊的表觀轉(zhuǎn)錄測(cè)序?qū)＜遥?
Shanghai Cloud-seq Biotech Co., Ltd.
地址：上海市松江區(qū)莘磚公路 518 號(hào) 20 號(hào)樓 3 樓
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發(fā)表期刊：Molecular Cell
影響因子：14.548
實(shí)驗(yàn)方法：m7G MeRIP seq、m7G MeRIP qPCR、RNA-seq等 文章內(nèi)容
1. 肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549特異性miRNA中m7G的檢測(cè)
作者用抗體富集法m7G MeRIP seq（云序提供此服務(wù)）鑒定肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中含有m7G的成熟miRNA。挑選其中高度富集的miRNA進(jìn)行MeRIP-qPCR（云序提供此服務(wù)）驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)其中五個(gè)miRNA確實(shí)存在m7G修飾。
前期研究發(fā)現(xiàn)RNA甲基化酶METTL1介導(dǎo)tRNA的m7G修飾，于是作者開(kāi)始研究METTL1對(duì)前面鑒定到的miRNA（如let-7e-5p）的m7G修飾的影響。在A549細(xì)胞中敲除METTL1，發(fā)現(xiàn)m7G甲基化修飾下調(diào)的miRNA比上調(diào)或不變的miRNA多，并且這種下調(diào)可以通過(guò)回補(bǔ)METTL1的表達(dá)來(lái)挽救。 圖1 A549細(xì)胞特異性miRNA中m7G的檢測(cè) 2.METTL1抑制A549細(xì)胞的遷移
METTL1敲除后，m7G甲基化修飾下調(diào)的miRNA大部分與細(xì)胞遷移功能相關(guān)，因此作者推測(cè)METTL1可能通過(guò)調(diào)控miRNA（包括let-7家族）影響細(xì)胞遷移功能。為了探索這種可能性，作者首先測(cè)試了METTL1是否影響A549細(xì)胞的遷移。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，敲除METTL1可明顯增加A549遷移能力，但不影響細(xì)胞增殖。后期作者又進(jìn)行回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)回補(bǔ)METTL1后細(xì)胞遷移能力下降。 圖2 敲除METTL1促進(jìn)細(xì)胞遷移 上述結(jié)果表明，METTL1可能通過(guò)調(diào)控miRNA的m7G甲基化影響細(xì)胞遷移，為了進(jìn)一步探索這一可能性，作者進(jìn)行RNA-seq（云序提供此服務(wù)）分析，以確定METTL1敲降前后對(duì)基因表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)了254個(gè)上調(diào)和60個(gè)下調(diào)的基因。KEGG分析發(fā)現(xiàn)表達(dá)上調(diào)的基因多數(shù)參與細(xì)胞遷移途徑，這與METTL1敲除后的細(xì)胞表型一致。隨后作者調(diào)查了METTL1調(diào)節(jié)的基因是否也是m7G修飾的miRNA的靶點(diǎn)，結(jié)果驗(yàn)證確實(shí)如此，上述結(jié)果表明METTL1通過(guò)調(diào)控miRNA的m7G修飾，進(jìn)而影響其靶基因表達(dá)，從而改變細(xì)胞遷移能力。 圖3 METTL1通過(guò)影響miRNA靶基因表達(dá)發(fā)揮功能 3.METTL1 通過(guò)let-7調(diào)節(jié)HMGA2的表達(dá)
為了研究METTL1敲降后，差異表達(dá)的基因與m7G修飾的miRNA之間的關(guān)系，作者挑選了HMGA2進(jìn)行進(jìn)一步研究，它是METTL1敲降后上調(diào)明顯的基因之一，其3 UTR區(qū)顯著富集了幾個(gè)含有m7G的miRNA的結(jié)合位點(diǎn)，包括let-7（5p）、miR-125（5p）和miR-92（3p）。
首先，作者證實(shí)METTL1基因敲除可增加細(xì)胞中HMGA2的mRNA表達(dá)和蛋白質(zhì)水平。接著作者通過(guò)熒光素酶實(shí)驗(yàn)，證實(shí)METTL1通過(guò)3 UTR對(duì)HMGA2的表達(dá)產(chǎn)生影響。為了證實(shí)METTL1對(duì)HMGA2的3 UTR的調(diào)節(jié)是通過(guò)miRNA的作用介導(dǎo)的，作者重點(diǎn)了研究含有m7G甲基化修飾的let-7，它在HMGA2的3 UTR中有7個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，刪除let-7種子序列后，兩者無(wú)法結(jié)合，熒光素酶活性增加，并且METTL1失去對(duì)HMGA2的調(diào)節(jié)作用。隨后作者做回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，METTL1敲降引起的HMGA2蛋白的上調(diào)，可以通過(guò)回補(bǔ)成熟let-7e-5p miRNA進(jìn)降低。這些數(shù)據(jù)證實(shí)METTL1確實(shí)通過(guò)let-7調(diào)節(jié)HMGA2的表達(dá)。 圖4 METTL1 通過(guò)let-7調(diào)節(jié)HMGA2的表達(dá) 4. METTL1直接修飾let-7e pri-miRNA并調(diào)節(jié)其加工過(guò)程
那么問(wèn)題來(lái)了，METTL1是如何影響let-7的呢？作者通過(guò)紫外交聯(lián)和免疫沉淀（CLIP）證實(shí)METTL1直接結(jié)合到miRNA的前體，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)METTL1影響miRNA（如let-7e-5p）成熟體的表達(dá)（非miRNA前體），并排除METTL1對(duì)剪接因子的影響。接下來(lái)通過(guò)RIP實(shí)驗(yàn)、體外剪接和甲基化轉(zhuǎn)移酶活性實(shí)驗(yàn)等研究發(fā)現(xiàn)METTL1對(duì)miRNA（如let-7e-5p）成熟的影響是直接的、且依賴于m7G修飾的。 圖5 METTL1直接修飾let-7e pri-miRNA并調(diào)節(jié)其加工過(guò)程 5. G-四聯(lián)體標(biāo)記標(biāo)記m7G修飾的miRNA
為了探討let-7e的m7G甲基化如何影響其體內(nèi)加工的機(jī)制，作者通過(guò)靶向質(zhì)譜確定let-7e-5p中m7G修飾的位點(diǎn)實(shí)G11。生信分析發(fā)現(xiàn)G11所在位置是GG-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)（G-quadruplex，G2+N4G2+N4G2+N4G2+），為了探討G-四聯(lián)體與m7G之間的聯(lián)系，作者分析了含有m7G的miRNA的堿基組成，評(píng)估了G-四聯(lián)體基序的潛在富集，發(fā)現(xiàn)G四元結(jié)構(gòu)在METTL1影響的發(fā)生m7G修飾的miRNA中都存在。 圖6 G-四聯(lián)體標(biāo)記 m7G修飾的miRNA 6.m7G修飾位點(diǎn)影響G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)莖環(huán)平衡且促進(jìn)miRNA加工
那么G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)與m7G修飾的關(guān)系是怎樣的？作者進(jìn)一步通過(guò)圓二色譜、變性實(shí)驗(yàn)和序列突變等實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。結(jié)果觀察到，G11突變通過(guò)將結(jié)構(gòu)平衡轉(zhuǎn)移到典型的莖環(huán)結(jié)構(gòu)來(lái)影響pri-let-7e的折疊。相比之下，G4和G5突變對(duì)結(jié)構(gòu)平衡沒(méi)有明顯影響。這些結(jié)果表明，G11的甲基化有不利于let-7e的莖環(huán)結(jié)構(gòu)平衡。
接下來(lái)，作者使用含DAG的pri-let-7e發(fā)夾寡核苷酸來(lái)確定誘導(dǎo)的結(jié)構(gòu)變化是否影響體內(nèi)miRNA的加工，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在G11處的pri-let-7e甲基化通過(guò)破壞局部G-四鏈結(jié)構(gòu)促進(jìn)其加工。 圖7 m7G修飾位點(diǎn)影響G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)莖環(huán)平衡且促進(jìn)miRNA加工 總結(jié)
作者首先通過(guò)m7G MeRIP seq找到肺癌細(xì)胞系中特異性的發(fā)生m7G修飾的miRNA，并對(duì)其驗(yàn)證。隨后作者發(fā)現(xiàn)METTL1甲基化酶介導(dǎo)的m7G通過(guò)破壞G-四聯(lián)體影響莖環(huán)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，從而促進(jìn)其從pri-到pre-miRNA的過(guò)程，最終導(dǎo)致miRNA成熟。成熟的miRNA通過(guò)結(jié)合下游靶基因，抑制細(xì)胞遷移，從而抑制肺癌。
圖8 m7G在miRNA生物合成中的作用 云序生物m7G RNA甲基化測(cè)序技術(shù)服務(wù)
云序生物提供兩種m7G RNA甲基化測(cè)序服務(wù)：（1）m7G RNA甲基化單堿基測(cè)序，可對(duì)m7G修飾進(jìn)行高通量檢測(cè)和單堿基定位；（2）MeRIP測(cè)序，可通過(guò)m7G特異性抗體，抓取有甲基化修飾的片段進(jìn)行測(cè)序，對(duì)m7G修飾進(jìn)行高通量測(cè)序和peak峰定位。此外，云序生物針對(duì)m7G RNA甲基化開(kāi)發(fā)了多款產(chǎn)品，可實(shí)現(xiàn)對(duì)mRNA、LncRNA、pri-miRNA、tRNA和rRNA等多類(lèi)RNA分子的m7G甲基化修飾水平的全面檢測(cè)。
m7G RNA甲基化單堿基測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程圖
m7G MeRIP測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程圖 樣本要求
樣品類(lèi)型
細(xì)胞、組織或RNA，其他樣本類(lèi)型請(qǐng)電詢。
樣品量
1.單堿基測(cè)序方式：
a) 細(xì)胞： 1 108
b) 組織：500 mg - 5 g
c) RNA：100 g - 300 g
2. MeRIP測(cè)序方式：
a) 細(xì)胞： 2 107
b) 組織：100 mg - 1g
c) RNA：30 g - 300 g
d) 超微量RNA滿足500 ng - 30 g 樣品運(yùn)輸及保存
樣品運(yùn)輸：樣品置于1.5mL離心管中，封口膜封好，干冰運(yùn)輸。
樣品保存：細(xì)胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護(hù)劑處理，液氮凍存后-80℃保存；RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中，-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
云序優(yōu)勢(shì)
單堿基分辨
可對(duì)m7G甲基化修飾進(jìn)行單堿基定位。
高通量檢測(cè)
可對(duì)全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)的m7G位點(diǎn)進(jìn)行高通量地平行檢測(cè)。
全分子覆蓋
可全面地對(duì)mRNA、lncRNA、pri-miRNA、tRNA和rRNA等多類(lèi)RNA分子的m7G位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。
一站式服務(wù)
客戶僅需提供組織或細(xì)胞，云序生物一站式完成RNA抽提，樣品預(yù)處理，建庫(kù)，測(cè)序，數(shù)據(jù)分析全套流程。
專(zhuān)業(yè)的生物信息學(xué)分析
專(zhuān)業(yè)的生物信息學(xué)團(tuán)隊(duì)，能夠滿足客戶的各類(lèi)深入數(shù)據(jù)分析需求
云序生物RNA表觀修飾
云序作為一家依托于高通量測(cè)序的表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)科研服務(wù)公司，長(zhǎng)期致力于提供優(yōu)質(zhì)前沿表觀研究測(cè)序產(chǎn)品，繼m6A、m5C、m1A之后，云序隆重推出多款RNA新修飾，不僅m7G測(cè)序，還包括m3C測(cè)序、ac4C RNA乙?；瘻y(cè)序、2 -O-甲基化RNA測(cè)序產(chǎn)品，打造了全面的RNA修飾研究平臺(tái)。 云序，您身邊的表觀轉(zhuǎn)錄測(cè)序?qū)＜遥?
m7G （m3C）RNA 甲基化測(cè)序
ac4C RNA乙?；瘻y(cè)序
2 -O-甲基化RNA測(cè)序
超微量m6A甲基化測(cè)序
m6A RNA甲基化測(cè)序
m5C RNA甲基化測(cè)序
m1A RNA甲基化測(cè)序
比色法檢測(cè)整體甲基化水平
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