血紅素蛋白是一類以血紅素作為輔基的蛋白質(zhì)，它們?cè)谏矬w內(nèi)發(fā)揮多種重要功能，如氧運(yùn)輸、電子傳遞、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、抗氧化等。其中，辣根過氧化物酶HRP是一種在結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系上研究較為深入的模式血紅素蛋白酶，在生化檢測(cè)如ELISA中也有著廣泛應(yīng)用。其中的血紅素輔基不僅對(duì)酶的活性起關(guān)鍵作用，對(duì)維持蛋白質(zhì)特定三維結(jié)構(gòu)也有重要作用。但是，對(duì)于血紅素輔基如何影響血紅素蛋白構(gòu)象以及對(duì)此過程如何進(jìn)行快速檢測(cè)，還是一個(gè)值得探討的問題。 中國(guó)科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院技術(shù)生物與農(nóng)業(yè)工程研究所黃青課題組利用不同濃度的尿素處理HRP溶液以得到不同構(gòu)象（天然態(tài)及去折疊態(tài)）的蛋白樣品。后者與一定濃度的過氧化氫反應(yīng)生成一種發(fā)射峰位于450nm的熒光產(chǎn)物，該產(chǎn)物其實(shí)來源于變性蛋白質(zhì)中血紅素被過氧化氫所降解。研究發(fā)現(xiàn)，隨著尿素濃度增加（蛋白去折疊），該產(chǎn)物熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。基于此熒光強(qiáng)度，可以對(duì)HRP在不同濃度的尿素處理下的構(gòu)象進(jìn)行定量分析，并且將所得的去折疊熱力學(xué)參數(shù)與常用的蛋白質(zhì)構(gòu)象分析方法（圓二色光譜、色氨酸熒光光譜）所得參數(shù)進(jìn)行比較。結(jié)果表明，三種方法所得到的結(jié)果吻合，從而證明了利用血紅素蛋白中輔基血紅素降解產(chǎn)物熒光信號(hào)可以對(duì)血紅素蛋白構(gòu)象進(jìn)行快速和定量分析。 這項(xiàng)工作曾得到中科院“百人計(jì)劃”、國(guó)家自然科學(xué)基金等項(xiàng)目的資助。  
 基于血紅素-過氧化氫反應(yīng)產(chǎn)物熒光強(qiáng)度的HRP構(gòu)象分析  

上一篇： 離子色譜法可檢測(cè)面包中的致癌物質(zhì)溴酸鉀

下一篇： 用熒光法來測(cè)量樣品容易造成哪些污染？