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用電熱恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行巧克力瓊脂培養(yǎng)基生長試

日期：2019-04-08 / 人氣：

用電熱恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行巧克力瓊脂培養(yǎng)基生長試驗
1.無菌操作要求     培養(yǎng)基生長試驗應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。稀釋液、培養(yǎng)基、實驗器具等滅菌時，應(yīng)按照中華人民共和國藥典中滅菌法的要求，采用驗證合格的滅菌程序滅菌。 2.菌種復(fù)蘇     啟開流感嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌菌種，用0.9%無菌氯化鈉溶液0.3mL制成菌懸液，加至巧克力瓊脂斜面培養(yǎng)基中，36℃ 1℃培養(yǎng)18h~24h。 3.菌種傳代     取1mL上述復(fù)蘇后的流感嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌新鮮培養(yǎng)物，加至巧克力瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在電熱恒溫培養(yǎng)箱36℃ 1℃中培養(yǎng)18h~24h。 4.菌種增菌培養(yǎng)     接種上述傳代后的流感嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌的新鮮培養(yǎng)物至巧克力瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在電熱恒溫培養(yǎng)箱36℃ 1℃中培養(yǎng)18h~24h。 5.菌懸液制備     將上述增菌培養(yǎng)后的流感嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌的新鮮培養(yǎng)物分別用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋， 經(jīng)比濁后制成每1mL含菌數(shù)約相當(dāng)于100cfu~1000cfu的菌懸液。 6.培養(yǎng)基接種     用蒸餾水或去離子水按說明上的濃度配制待檢巧克力瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)， 121℃高壓滅菌15min后，冷卻至45℃~50℃左右， 加人7%~10%無菌脫纖維兔血或馬血， 混勻， 置于85℃水浴中10min~15min加熱， 在加熱過程中應(yīng)輕輕搖動， 使血液的色澤由鮮紅色變成巧克力色， 冷卻至50℃左右， 迅速在每個平皿(直徑為90mm)中加入約15mL~20mL，待冷卻至室溫凝固后進(jìn)行檢測。     檢測時，每個平皿加入0.1mL上述菌懸液。每種質(zhì)控菌株接種2個平皿，并用1個未接種的培養(yǎng)基平皿做空白對照。置36℃ 1℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中，流感嗜血桿菌培養(yǎng)18h~24h，置36℃ 1℃在5%~8%COz環(huán)境中， 腦膜炎奈瑟菌培養(yǎng)18h~24h。觀察菌落生長情況， 并記錄結(jié)果。

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