從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；  樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。 魚雌激素受體ELISA試劑盒操作方法技術(shù)檢測范圍試劑盒性能  檢測范圍：12.5 pg/mL – 400 pg/mL。  靈敏度：最低檢測濃度小于1.0 pg/mL。  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。 試劑盒組成
 
 備注：
1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：400、200、100、50、25、12.5 pg/mL
2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
 
注意事項(xiàng) 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。 不能使用過期產(chǎn)品。 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。