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液相色譜的眼睛——檢測(cè)器

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-03-26  來(lái)源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):262
    高效液相色譜系統(tǒng)是由液體輸送系統(tǒng)-泵、進(jìn)樣器、色譜分離柱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)幾部分組成。檢測(cè)器是高效液相色譜系統(tǒng)的眼睛,它將樣品的物理或化學(xué)特性信息轉(zhuǎn)換成易測(cè)量的電信號(hào)輸入到記錄儀,并記錄下來(lái),得到樣品組分分離的色譜圖。
    通常將檢測(cè)器分為通用型和選擇型2種,通用型檢測(cè)器是指可連續(xù)測(cè)量色譜柱流出物(包括流動(dòng)相和樣品組分)的全部特性變化,如示差折光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器等;而選擇型檢測(cè)器是用以測(cè)量被分離樣品組分某種特性的變化,這類檢測(cè)器對(duì)樣品中組分的某種物理或化學(xué)性質(zhì)敏感,而這一性質(zhì)是流動(dòng)相所不具備的,或至少在操作條件下不顯示,如紫外檢測(cè)器、光電二極管陣列檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器等。

基于Lambert-Beer定律,即被測(cè)組分對(duì)紫外光或可見(jiàn)光具有吸收,且吸收強(qiáng)度與組分濃度成正比。 很多有機(jī)分子都具紫外或可見(jiàn)光吸收基團(tuán),有較強(qiáng)的紫外或可見(jiàn)光吸收能力,因此UV-VIS檢測(cè)器既有較高的靈敏度,也有很廣泛的應(yīng)用范圍。由于UV-VIS對(duì)環(huán)境溫度、流速、流動(dòng)相組成等的變化不是很敏感,所以還能用于梯度淋洗。 1.對(duì)沒(méi)有紫外/可見(jiàn)波長(zhǎng)吸收的樣品無(wú)法檢測(cè)2.流動(dòng)相的選擇受到流動(dòng)相組分對(duì)紫外可見(jiàn)光的吸收影響,現(xiàn)有紫外可見(jiàn)檢測(cè)器在常用的流動(dòng)相下當(dāng)波長(zhǎng)低于210nm時(shí)檢測(cè)效果較差; 3.不同物質(zhì)在同一檢 測(cè)波長(zhǎng)下的響應(yīng)因子不相同
以光電二極管陣列(或CCD陣列,硅靶攝像管等)作為檢測(cè)元件的UV-VIS檢測(cè)器。它可構(gòu)成多通道并行工作,同時(shí)檢測(cè)由光柵分光,再入射到陣列式接受器上的全部波長(zhǎng)的信號(hào),然后,對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù),得到的是時(shí) 間、光強(qiáng)度和波長(zhǎng)的三維譜圖。與普通UV-VIS檢測(cè)器不同的是,普通UV-VIS檢測(cè)器是先用單色器分光,只讓特定波長(zhǎng)的光進(jìn)入流動(dòng)池。而二極管陣列UV-VIS檢測(cè)器是先讓所有波長(zhǎng)的光都通過(guò)流動(dòng)池,然后通過(guò)一系列分光技術(shù),使所有波長(zhǎng)的光在接受器上被檢 特點(diǎn)與紫外檢測(cè)器相同,同時(shí)可動(dòng)態(tài)的在同一時(shí)間檢測(cè)所有波長(zhǎng)下的吸收。 1.與紫外可見(jiàn)家測(cè)起相
2.靈敏度和重現(xiàn)性低 于紫外檢測(cè)器。
原理:基于樣品組分的折射率與流動(dòng)相溶劑折射率有差異,當(dāng)組分洗脫出來(lái)時(shí),會(huì)引起流動(dòng)相折射率的變化,這種變化與樣品組分的濃度成正比。 RI 檢測(cè)器根據(jù)其設(shè)計(jì)原理可分為反射型(根據(jù)Fresnel定律)、折射型(根據(jù)Snell定律)和干涉型三種類型。 示差折光檢測(cè)法也稱折射指數(shù)檢測(cè)法。絕大多數(shù)物質(zhì)的折射率與流動(dòng)相都有差異,所以RI是一種通用的檢測(cè)方法。雖然其靈敏度比其他檢測(cè)方法相比要低1-3個(gè)數(shù)量級(jí)。對(duì)于那些無(wú)紫外吸收的有機(jī)物(如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴)是比較適合的。在凝膠色譜中是必備檢測(cè)器,在制備色譜中也經(jīng)常使用。 1.靈敏度很低
2.不能用于梯度洗脫系統(tǒng)
ELSD是基于溶質(zhì)的光散射性質(zhì)的檢測(cè)器。由霧化器、加熱漂移管(溶劑蒸發(fā)室)、激光光源和光檢測(cè)器(光電轉(zhuǎn)換器)等部件構(gòu)成。色譜柱流出液導(dǎo)入霧化器,被載氣(壓縮空氣或氮?dú)猓╈F化成微細(xì)液滴,液滴通過(guò)加熱漂移管時(shí),流動(dòng)相中的溶劑被蒸發(fā)掉,只留下溶質(zhì),激光束照在溶質(zhì)顆粒上產(chǎn)生光散射,光收集器收集散射光并通過(guò)光電倍增管轉(zhuǎn)變成電信號(hào)。 因?yàn)樯⑸涔鈴?qiáng)只與溶質(zhì)顆粒大小和數(shù)量有關(guān),而與溶質(zhì)本身的物理和化學(xué)性質(zhì)無(wú)關(guān),所以ELSD屬通用型和質(zhì)量型檢測(cè)器。適合于無(wú)紫外吸收、無(wú)電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測(cè)。其靈敏度與載氣流速、汽化室溫度和激光光源強(qiáng)度等參數(shù)有關(guān)。與示差折光檢測(cè)器相比,它的基線漂移不受溫度影響,信噪比高,也可用于梯度洗脫。檢測(cè)任何不揮發(fā)樣品,提供精確的樣品組份和幾乎相同的響應(yīng)因子,靈敏度高于RI、低波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和其他ELSD,不需要日常維護(hù),可和HPLC、GPC和SFC連用 流動(dòng)相相不能含有不揮發(fā)組分(可使用有機(jī)酸堿替代)
許多有機(jī)化合物,特別是芳香族化合物、生化物質(zhì),如有機(jī)胺、維生素、激素、酶等,被一定強(qiáng)度和波長(zhǎng)的紫外光照射后,發(fā)射出較激發(fā)光波長(zhǎng)要長(zhǎng)的熒光。熒光強(qiáng)度與激發(fā)光強(qiáng)度、量子效率和樣品濃度成正比。有的有機(jī)化合物雖然本身不產(chǎn)生熒光,但可以與發(fā)熒光物質(zhì)反應(yīng)衍生化后檢測(cè)。 結(jié)構(gòu) 有非常高的靈敏度和良好的選擇性,靈敏度要比紫外檢測(cè)法高2-3個(gè)數(shù)量級(jí)。而且所需樣品量很小,特別適合于藥物和生物化學(xué)樣品的分析。 1.樣品的選擇性較強(qiáng)
2.其它與紫外檢測(cè)器相似
天津蘭博提供示差折光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、紫外檢測(cè)器、光電二極管陣列檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器等各種類型檢測(cè)器。
 
 
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