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了解細(xì)菌的染色原理與用途-正置生物顯微鏡觀察細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)
革蘭氏染色法(Gram staining)
一、目的：了解細(xì)菌的特殊染色原理與用途。
二、原理：依據(jù)細(xì)菌的細(xì)胞壁化學(xué)組成不同，可分為革蘭氏陽性菌G(+)：細(xì)胞壁有多層勝肽
聚糖。革蘭氏陰性菌G(-)：細(xì)胞壁的外層由脂多糖及單薄的勝肽聚糖所組成。酒精脫色
過程中可將CV-I 復(fù)合物溶出，所以脫色為革蘭氏鑒別染色中的重要步驟。
三、材料：
 1.顯微鏡  2.拭鏡紙 3.洋杉油  4.酒精燈 5.試管架  6.接種環(huán) 7.染色盤  8.鑷子
 9.玻片夾 10.載玻片11.蒸餾水 12.衛(wèi)生紙13.二甲苯 14.95%酒精
15.液態(tài)培養(yǎng)菌液：
  ○1Escherichia coli (E.coli)大腸桿菌  ○2Lactobacillus plantarum 胚芽乳桿菌
16.染色試劑：
  ○1結(jié)晶紫Crystal violet stain  ○2碘媒染劑 Gram iodine mordant
  ○395%酒精 Ethyl alcohol，95%  ○4番紅溶液 Safranin solution
四、方法：
  (1)制作抹片：取slide 洗凈，烘干備用→無菌loop 菌液涂抹均勻→酒精燈余熱烘干
  (2)染色
  ○1初染劑：結(jié)晶紫1min→背面水洗  ○2媒染劑：碘液1min→背面水洗
  ○3脫色劑：30sec(95%酒精)→背面水洗  ○4番紅復(fù)染：30sec→背面水洗
  (結(jié)合成CV﹣I 化合物，增加結(jié)晶時(shí)與CW 結(jié)合力)