光學(xué)顯微鏡物鏡聚光能力小于數(shù)字孔徑大的物鏡

  數(shù)值孔徑（N.A.）小的物鏡聚光能力小于數(shù)字孔徑大的物鏡。N.A.
對空間分辨率也很重要：N.A.大的透鏡比N.A.小的透鏡更能分辨標(biāo)本中
的精細(xì)結(jié)構(gòu)。放大倍數(shù)也很重要：高倍放大物鏡（100 x ）的聚光能力
弱于60 x或40x 的物鏡。

  因此用40 x或60 x，N.A.為1.4 的油鏡可以獲得最好的最明亮的圖
像，因?yàn)檫@樣鏡頭能收集絕大部分的光、很好的分辨結(jié)構(gòu)、并能有效地
放大并傳至檢測器、以高對比度成像（lnoue 1986）。

  要獲得最佳效果，還要正確選擇蓋玻片的厚度，而且觀察熒光時(shí)，
要在蓋玻片的正下面，成像時(shí)則需標(biāo)本固定介質(zhì)的折射率與浸潤鏡頭的
介質(zhì)的折射率（常為1.5 ）相匹配。要對含有水的標(biāo)本成像，則需要一
種特殊的水浸潤鏡頭

  倒置顯微鏡的光路。光線從光源（如水銀燈或氙燈）發(fā)出后，特定
波長的光線通過一個(gè)激發(fā)光濾光器，以激發(fā)特定的熒光染料。光線然后
到達(dá)二色光束分裂器，使得短波長的光反射至標(biāo)本。波長較長的發(fā)射光
卻通過光束分裂器。

  發(fā)射光濾光器將所有來自激發(fā)光濾光器的光線減弱，卻能讓標(biāo)本發(fā)
射的任何熒光有效地通過。發(fā)射光的波長總是比激發(fā)光的波長大。插圖
：DAPI波光器的透光曲線。

  點(diǎn)線表示激發(fā)光帶通濾光器，實(shí)線表示光束分裂器，短條線表示發(fā)
射光帶通濾光器

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