澳大利亞國(guó)立大學(xué)Gaetan Burgio博士公布的實(shí)驗(yàn)結(jié)果Sanger測(cè)序圖。該圖看起來很混亂，但仔細(xì)觀察可以發(fā)現(xiàn)，每一個(gè)堿基的峰圖，后面都跟著一個(gè)滯后的峰，如下圖所示，我們用與堿基相同顏色的箭頭標(biāo)出了峰的位移，這實(shí)際上是移碼突變?cè)斐傻?。我們?cè)谝粋€(gè)誘變/恢復(fù)試驗(yàn)中，將發(fā)生移碼突變的片段和野生型的片段的混合物進(jìn)行Sanger測(cè)序，就會(huì)出現(xiàn)類似的峰圖。

　　因此事實(shí)上，Burgio博士的實(shí)驗(yàn)中，目的基因發(fā)生了移碼突變，造成這種峰圖，可能恰恰證實(shí)了NgAgo有效。不過似乎NgAgo切割基因組的效率并不高，造成了多種移碼型的混合物。眾所周知,基因編輯技術(shù)的主要作用之一,就是在基因中造成移碼突變,使其失去功能.

　　Burgio博士說他們所用的引物已經(jīng)過驗(yàn)證，是特異性的，那么，如果NgAgo無效，實(shí)驗(yàn)中除了目的基因的完整片段以外，不會(huì)出現(xiàn)任何額外條帶，更不會(huì)出現(xiàn)移碼現(xiàn)象。

　　那么出現(xiàn)的那些額外條帶，為什么經(jīng)過Sanger測(cè)序，序列是非特性的呢?我估計(jì)是因?yàn)樗麄冊(cè)O(shè)計(jì)的guider ssDNA的序列特異性不好導(dǎo)致的。他們的guider序列，應(yīng)該就是之前CRISP/CAS9實(shí)驗(yàn)所用的guider，但CRISP/CAS9識(shí)別序列必須包含PAM序列，所以對(duì)序列特異性的要求沒有那么高，而NgAgo方法采用ssDNA作為guider，沒有PAM序列的限制，但同時(shí)對(duì)guider序列的特異性要求就高了。如果guider序列的特異性不夠，肯定會(huì)對(duì)基因組序列亂切。

　　打個(gè)比方，這就像用google查找一個(gè)詞“韓春雨”，找到的一定是“韓春雨”，但是如果你只輸入“春雨”，那么出來的就不一定是“韓春雨”，還有“春雨貴如油”，“春雨醫(yī)生”，...，等等。

　　一種新技術(shù)在誕生之際，一般都存在很多問題。如果韓春雨沒有造假, 那么NgAgo技術(shù)作為一種新技術(shù)，前途是光明的，但無疑需要針對(duì)不同的生物、細(xì)胞和基因序列，進(jìn)行設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化，提高基因組切割和編輯效率。