熒光顯微鏡與普通透射光吸收研究用顯微鏡的區(qū)別
熒光顯微鏡技術(shù):光學(xué)系統(tǒng)
發(fā)射光的波長(zhǎng)要長(zhǎng)于激發(fā)光的波長(zhǎng),是熒光顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)的基礎(chǔ)
這種顯微鏡與普通透射光吸收研究用的顯微鏡的區(qū)別是有兩個(gè)濾片。一個(gè)初級(jí)(激發(fā))
濾片置于光源和標(biāo)本之間。這個(gè)濾片與所用光源組合在一起,提供一個(gè)相當(dāng)波段的光,
這光的波長(zhǎng)與被研究的熒光色素的激發(fā)波峰相適應(yīng)。另一個(gè)濾片即第二濾片或屏蔽濾
片,它只是為了防止激發(fā)波長(zhǎng)光進(jìn)入觀察者的眼,置于物鏡和眼之間。在所使用的激發(fā)
光范圍內(nèi),其透光度應(yīng)該盡可能低,而在熒光色素發(fā)射光譜區(qū)域內(nèi),其透光度應(yīng)盡可能
熒光染色術(shù)(fluorochromy)
用于染色的熒光染料稱為熒光色素以區(qū)別子那些專用予透射
光觀察的透光色素(diachrome)。許多染料既可用為透光色素又可用為熒光色素。例
如剛果紅、伊紅、鹼性品紅(對(duì)玫苯胺)。大多數(shù)黃、橙和紅色染料實(shí)際上具有熒光,就
這些染料而論,熒光顯微鏡術(shù)只是顯示染料的另外一種方法,它的應(yīng)用不會(huì)改變?nèi)旧?br>特性。使用強(qiáng)熒光料,由于較低濃度的染料便可被觀察到,因而增加了染色反應(yīng)的靈敏
度。然而一個(gè)標(biāo)本染色很深的區(qū)域,由于濃縮熄滅,可以只呈現(xiàn)微弱的熒光,除非使用
落射照明。由于這個(gè)原因,通常用于熒光染色的染液,比透光染色要稀得多。一個(gè)典型
的熒光色素染液,其濃度是1:10,000,有時(shí)使用更稀的溶液。
用熒光顯微鏡術(shù)檢查一個(gè)染色反應(yīng)的結(jié)果,可有兩個(gè)特殊的優(yōu)點(diǎn)5首先擴(kuò)大了可用
染料的范圍,包括那些有熒光,但是在可見區(qū)域無色,或只是淺染的染料。這類熒光色
素的代表是硫黃T和BA0。熒光顯微鏡術(shù)第二個(gè)優(yōu)點(diǎn)是,這種方法
較通常的吸收顯微鏡術(shù),能顯示更少兩的燃料
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