顯微鏡通常配備有3—4個物鏡-生物暗視野觀察
顯微鏡通常都配備有3—4個物鏡,其放大倍數(shù)分別在4×到100
×之間。物鏡的工作距離指的是在準確的焦點狀態(tài)下透鏡的外表面
與蓋玻片(如果使用的話)表面或與被觀察樣品之間的距離。數(shù)值孔
徑值越大、分辨率越高,物鏡的工作距離就越短。
在有效放大范圍內(nèi),放大倍數(shù)越大,能看清的被觀察對象越小
。人眼的分辨能力在0.2 mm,因此物鏡的有效放大倍數(shù)的極限是
其數(shù)值孔徑值的l 000倍。大多數(shù)標準顯微鏡使用10×目鏡,在使
用油鏡時達到其最高放大倍數(shù),即1 000×。在使用高質(zhì)量的物鏡
時,也可以配備15×目鏡,從而獲得l 500×的有效放大倍數(shù),但
在此基礎(chǔ)上進一步提高放大倍數(shù)將并不能使我們看到更多的細節(jié)。
使光學顯微鏡的總放大倍數(shù)達到10 000×是完全做得到的,但這種
放大將僅僅是將一個模糊的斑點進一步擴大而已。而電子顯微鏡具
有足夠高的分辨率,可以保證更高的有效放大倍數(shù)。
恰當?shù)臉悠氛彰鲗︼@微鏡的分辨率也非常重要。在光源和樣品
之間安裝凹面鏡的顯微鏡所形成的錐形照明光束很窄,數(shù)值孔徑
值也低。而在載物臺下方安裝鏡臺聚光器可以改善顯微鏡的分辨率
。作為一個大的集光透鏡,聚光器可以形成寬的錐形光束投射到載
片并進入物鏡,從而增加數(shù)值孔徑值。
暗視野顯微鏡
通過對照明方式進行簡單的改變,可以對活的細胞及生物進行觀
察。將一個中空的光束在樣品上聚焦,只有被樣品反射或折射的光
線才能進入物鏡形成物像,其他未經(jīng)反射或折射的光線不能進入物
鏡,使得在明亮物像周圍形成黑的背景。正由于這種顯微術(shù)視野的
背景是黑色的,因此被稱為暗視野顯微術(shù)。暗視野顯微鏡可被用于
對一些細菌進行鑒定,例如體形很薄并具有特定外形的梅毒病原體
梅毒螺旋體。很多細胞較大的真核微生物的內(nèi)部結(jié)構(gòu)也能用暗視野
顯微鏡進行觀察。