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未來生命體抗生素?cái)?shù)據(jù)分析關(guān)鍵技術(shù)綜合

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-06-28  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):47
核心提示:生物類似藥,抗體-藥物偶聯(lián)物(ADC)和糖原工程蛋白都可以被認(rèn)為是下一代生物藥物?! DC藥物包括與細(xì)胞毒藥物通過賴氨酸和半胱氨酸殘基共價(jià)結(jié)合的單克隆抗體。ADC既具有大分子藥物的特異性,又具有小分子藥物的細(xì)胞毒性,由于它們具有將化學(xué)

  生物類似藥,抗體-藥物偶聯(lián)物(ADC)和糖原工程蛋白都可以被認(rèn)為是下一代生物藥物。

  ADC藥物包括與細(xì)胞毒藥物通過賴氨酸和半胱氨酸殘基共價(jià)結(jié)合的單克隆抗體。ADC既具有大分子藥物的特異性,又具有小分子藥物的細(xì)胞毒性,由于它們具有將化學(xué)治療性細(xì)胞毒藥物直接遞送至腫瘤抗原位點(diǎn)的能力,因此具有特別的腫瘤學(xué)意義。ADC中的抗體用于靶向識(shí)別和大量靶標(biāo)表達(dá)和內(nèi)化,而藥物則應(yīng)高度有效,并具有明確的作用機(jī)制,二者件的連接子則應(yīng)在血漿中保持穩(wěn)定并且在內(nèi)化時(shí)穩(wěn)定釋放藥物。

  當(dāng)前,已上市的ADC藥物共有四個(gè)。Gemtuzumab ozogamicin(Mylotarg,Pfizer / Wyeth)是2001年批準(zhǔn)用于治療急性骨髓性白血病的第一個(gè)ADC藥物; 然而,它于2014年退出市場(雖然仍在日本銷售),并于2017年重新進(jìn)入美國市場。Brentuximab vedotin(Adcetris,Seattle Genetics and Millenial/Takeda)于2011年被批準(zhǔn)用于霍奇金淋巴瘤。曲妥珠單抗(Kadcyla, Roche/Genentech)則是在2013年被批準(zhǔn)用于HER2陽性乳腺癌。

  ADC藥物的表征包括單克隆抗體的許多關(guān)鍵質(zhì)量屬性(如氨基酸序列,電荷異質(zhì)性,翻譯后修飾(PTM)等),以及獨(dú)特的表征如藥物與抗體的比例(DAR)、藥物分布,藥物結(jié)合位點(diǎn)和游離藥物性質(zhì)(如游離及結(jié)合的細(xì)胞毒藥物的量,毒性和生物利用度等;參見表I)。

表1 ADC藥物標(biāo)準(zhǔn)方法質(zhì)量屬性方法歸屬鑒別質(zhì)譜、肽譜圖、測序單抗及ADC大小異質(zhì)性SDS-PAGE、SEC、MALS、MS單抗及ADC電荷異質(zhì)性IEF、陽離子交換單抗及ADC翻譯后修飾LC-MS單抗及ADC載藥量(DAR)UV,HIC,HPLCADC載藥量分布HIC,MSADC效力(藥物)毒性ADC效力(單抗)抗原結(jié)合ELISA單抗及ADC

  DAR的測定可以使用很多方法,其中之一就是疏水相互作用色譜(HIC)。HIC是反相高效液相色譜法(HPLC)的較溫和形式,因此即使在鏈間二硫鍵不存在的情況下也能保留ADC的完整性。流動(dòng)相由含鹽試劑組成,其濃度高時(shí)通過增加物質(zhì)和固定相之間的疏水相互作用來保留蛋白質(zhì),而后,保留的蛋白質(zhì)通過降低鹽濃度而被洗脫。典型的HIC洗脫液包括流動(dòng)相A:2.0M硫酸銨,用0.1M磷酸鈉調(diào)節(jié)pH7.0; 流動(dòng)相B:0.1M磷酸鈉(pH7.0)。HIC特別適合于ADC的分離,因?yàn)榇蠖鄶?shù)細(xì)胞毒藥物是疏水性的; ADC的疏水性取決于偶聯(lián)藥物的數(shù)量,因此可以使用HIC來分離具有不同DAR比率的ADC藥物。

  使用半胱氨酸殘基簡化連接的ADC藥物可以使用天然質(zhì)譜技術(shù)測量,結(jié)果也證明HIC與MS技術(shù)的結(jié)果一致。使用LC-MS技術(shù)對(duì)ADC藥物的DAR進(jìn)行測定,這種方法應(yīng)用到糖基化以及去糖基化的ADC藥物上。所獲得的圖譜可以被解卷積,從而計(jì)算DAR,這種計(jì)算通常使用軟件來集成所有的DAR峰值,用最少的用戶輸入并報(bào)告最終的DAR值。


 
關(guān)鍵詞: 藥物 ADC DAR HIC 單抗
 
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