蛋白質(zhì)的檢測(cè)和分析

  在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中，需要進(jìn)行兩種測(cè)量，最好對(duì)每個(gè)組分都
進(jìn)行測(cè)量。必須測(cè)量總蛋白質(zhì)和目的蛋白的量(通常是測(cè)量生物學(xué)
活性)。大多數(shù)常用分析方法的。沒(méi)有一種確定蛋
白質(zhì)是否存在的方法，就不可能分離蛋白質(zhì)，因此，必須要有一種
分析方法(定量的或至少半定量的)來(lái)確定哪種組分中含有大多數(shù)的
目的蛋白。

  有的分析方法方便、快捷(如酶活性的即時(shí)分光光度法測(cè)量)，
有的則是既耗時(shí)又繁瑣的生物學(xué)分析。后者可能需要幾天才能出結(jié)
果，而且這種情況很棘手，因?yàn)楫?dāng)知道了蛋白質(zhì)在哪個(gè)組分時(shí)，蛋
白質(zhì)可能由于降解或失活已經(jīng)丟失，而且，這種丟失直到下一步完
成并對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行分析后才能清楚。因此，任何快速的分析方法都
具有優(yōu)勢(shì)，盡管往往會(huì)由于加快了分析速度而降低了準(zhǔn)確性。
  測(cè)量總蛋白質(zhì)很有用，因?yàn)檫@可以表明每一步的純化程度，但
除非下一步特別依賴于有多少蛋白質(zhì)存在，否則總蛋白質(zhì)測(cè)量也并
不是十分重要，可以留出一個(gè)小樣品，當(dāng)純化完成后再進(jìn)行測(cè)量。
然而，知道最終產(chǎn)物(假設(shè)是純樣品)中有多少蛋白質(zhì)則十分重要，
因?yàn)閾?jù)此可以計(jì)算比活(如果該蛋白質(zhì)有活性的話)，并可與其他制
備物的比活進(jìn)行比較。通常的目標(biāo)是獲得盡可能高的比活(考慮到
回收率)，這意味著要保留盡可能多的目的蛋白，而最后總蛋白質(zhì)
的量則越少越好。蛋白質(zhì)分離和純化方法
  蛋白質(zhì)純化的現(xiàn)有方法范圍很廣，從簡(jiǎn)單的沉淀(從19世紀(jì)就
開(kāi)始使用)到復(fù)雜的層析和親和技術(shù)，后者不斷地得到發(fā)展和改進(jìn)
。方法可被分成幾種不同的類別(或許最好的一種是基于正在研究
的蛋白質(zhì)的特性)，如根據(jù)蛋白質(zhì)的特點(diǎn)，可以將方法分成明顯不
同但又相互關(guān)聯(lián)的4組：表面特征、結(jié)構(gòu)、凈電荷和生物學(xué)特性。

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