顯微鏡觀察水溶液中標(biāo)本最好選用浸水式物鏡

  觀察水溶液中的標(biāo)本(如活標(biāo)本)時(shí)最好選用浸水式物鏡。最近
幾家顯微鏡廠商專門為使用共聚焦顯微鏡觀察生理狀態(tài)下的標(biāo)本而
設(shè)計(jì)了大數(shù)值孔徑的浸水式物鏡。該物鏡與之前所用的浸水式物鏡
不同，它可供觀察固定在蓋玻片下方的標(biāo)本，工作距離約為250微
米。
  油浸物鏡的數(shù)值孔徑可比浸水式物鏡的數(shù)值孔徑大。盡管目前
有些油浸物鏡的工作距離約為200微米，但大多數(shù)油浸物鏡的工作
距離都相當(dāng)短(約為100微米)。只有用與浸油折光率匹配的介質(zhì)固
定標(biāo)本時(shí)，才能選用長工作距離的油鏡。如果選用含水的固定介質(zhì)
，則標(biāo)本內(nèi)厚度超過20微米左右處的圖像效果將明顯下降，圖像效
果下降是由球面像差造成的。此外，z軸上的距離檢測也需要校準(zhǔn)
。物鏡移動(dòng)(d。K)所引起的標(biāo)本內(nèi)焦平面移動(dòng)幅度(d。)取決于標(biāo)
本折光率與浸入介質(zhì)折光率的比值針孔大小是影響成像質(zhì)量的重要
因素。與第一個(gè)最小艾里斑半徑(近似于達(dá)到最大強(qiáng)度一半時(shí)的半
徑)相同的針孔，允許來自焦平面的大部分光線到達(dá)檢測儀，同時(shí)
阻止來自離焦區(qū)域的大部分光線通過。盡管它的橫向分辨率不如選
用更小的針孔，但卻比選用同樣光學(xué)系統(tǒng)的傳統(tǒng)顯微鏡要高20％。
在針孔半徑逐漸減小至約0．2×艾里斑半徑的過程中，橫向分辨率
隨之逐漸提高，但是如此小的針孔將導(dǎo)致95％的信號(hào)不能通過。

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