現(xiàn)代光學(xué)顯微鏡的分辨極限一般為2000埃-真菌觀察

電子顯微鏡的研究方法
現(xiàn)代光學(xué)顯微鏡的分辨極限一般為2 000埃，研究真菌外部形態(tài)一
般不成問題，但要研究其更精細(xì)的超微結(jié)構(gòu)就必須借助電子顯微鏡(簡
稱電鏡)。常用于觀察生物樣品的電子顯微鏡有兩種類型。一種是透射
電子顯微鏡(TEM)，另一種是掃描電子顯微鏡(SEM)。在觀察真菌細(xì)胞內(nèi)
部超微結(jié)構(gòu)，了解真菌的入侵方式以及引起昆蟲組織的病理變化等方面
需要進(jìn)行透射電鏡觀察，事先需制備超薄切片，而在觀察真菌各部分的
表面結(jié)構(gòu)時(shí)常使用掃描電鏡。(一)透射電鏡樣品制備

超薄切片制樣過程同石蠟切片制樣過程大體相同。它分為取材、固
定、漂洗、脫水、滲透與包埋、切片、染色等幾個(gè)環(huán)節(jié)。然而，超薄切
片操作過程更為精細(xì)與復(fù)雜。蟲生真菌的取材方法如下：

1．活體蟲生真菌為了保持真菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生前狀態(tài)，從活體上取
下組織后要在最短的時(shí)間內(nèi)投入固定液。所用工具要鋒利，組織應(yīng)小，
一般以l立方mm為宜。

2．孢子對(duì)于某些蟲生真菌孢子，可直接加入固定液后立即離心，
收集成團(tuán)菌體。但有些孢子固定離心之后，孢子之間的連續(xù)性不佳，常
有分散的情況。對(duì)此要采取預(yù)包埋的方法。就是說，離心成團(tuán)之后棄去
上清液，保持50℃溫水浴，另外，稱取19瓊脂放于50ml沸水中，待瓊脂
溶化后，輕輕滴入離心管，用解剖針攪拌，使瓊脂與孢子混合．放入冰
箱內(nèi)3—5分鐘，立刻移至冷卻的載玻片上予以切分，每片大約l立方mm
大小。這樣，就可以采用和組織塊完全一樣的方法進(jìn)行處理。

3．子實(shí)層用前述載片培養(yǎng)法培養(yǎng)，用光學(xué)顯微鏡檢查，待開始產(chǎn)
孢后用鋒利小刀連同瓊脂塊一起切成l立方mm大小，用于固定。

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