熒光顯微鏡設(shè)計的物鏡平面校準(zhǔn)的特點-光學(xué)儀器
生物研究質(zhì)量級顯微鏡臺,有足夠的重量能抗震(可能的情況
下放在一張防震桌
上)
正立或倒立反射熒光顯微鏡和光學(xué)設(shè)施包括:
反射照明器(n-1人工控制的中心和場光圈大??;篩選中間密度
的細縫和紅外濾
光器)
高倍物鏡頭(如60×、63×或100×)
激發(fā)濾光器,發(fā)射濾光器和雙色鏡
電子控制的遮光器
冷卻式CCD相機
計算機,帶有數(shù)字化圖像捕獲插件以及控制快門和圖像捕獲的
軟件1.顯微鏡座臺不能隨溫度熱脹冷縮,聚焦系統(tǒng)要求高質(zhì)量,
并且能夠在長期的時延圖
像捕獲過程中固定焦點以避免人工物象。顯微鏡應(yīng)該裝備高質(zhì)量
的反射照明器,包括一個100W HBO的汞弧燈,一個裝有反光鏡的燈,
能夠人工調(diào)節(jié)燈泡的亮度和Koehler反射照明同軸反射中心。
物鏡頭應(yīng)盡可能具有最高的分辨率,例如,配有高數(shù)
字化的光圈(1.4NA油鏡)
記住60×或者63×的鏡頭轉(zhuǎn)移光線的效率比100×的鏡頭較高
。然而,不能因
為這個優(yōu)點而忽略了系統(tǒng)的清晰度。鏡頭不應(yīng)該有形成對比的因
素,例如,能阻斷
光子傳送的相位環(huán),還應(yīng)該校準(zhǔn)鏡頭不能產(chǎn)生異彩(高度消色透
鏡),并且還應(yīng)該高
效傳送捕獲的光波。這些因素決定于熒光物質(zhì)的選擇。關(guān)于鏡頭
光譜效率的信息掌
握在制造商手中。
當(dāng)捕獲一個小標(biāo)本時,不可能平場校準(zhǔn)鏡頭(平面校準(zhǔn))。確實
,通常專門為外
熒光(Super Fluor-、Nikon;Fluor-或者Fluar-透鏡)設(shè)計的物
鏡不是平面校準(zhǔn)的,
因為這種校準(zhǔn)給透鏡增加了玻璃成分,玻璃成分越多,丟失光子
的地方越多。然而,
在一個平而寬的視場中,作者用DIC一級別平面高度消色物鏡取
得了很好的效果。
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