直接計數(shù)顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)量-生物圖像顯微鏡

長期以來，革蘭氏染色法一直是用于微生物觀察制樣的最常用方法
。將少量的樣品(約10μL)涂抹在顯微鏡載薄片中直徑約1．5cm圓形區(qū)
域上。然后通過文火加熱來熱固定或通空氣來干燥載薄片上的液滴。通
過一系列的著色和清洗步驟，該涂片用碘制劑染色、脫色，然后用一種
非特異番紅精再次染色。因為碘與碳水化合物反應(yīng)變成紫色，通過顯微
鏡觀察，革蘭氏陽性細(xì)胞呈現(xiàn)紫羅蘭至紫色。革蘭氏陰性細(xì)胞因為被其
LPS外包膜覆蓋，不會保留碘的染色效果。相反，它們保留了由非特異
染色(番紅精)賦予的粉紅色。

隨著對分枝桿菌和HP可能存在關(guān)系的擔(dān)憂的不斷增加，已經(jīng)使得金
屬加工液系統(tǒng)利益相關(guān)者關(guān)心抗酸性染色。分枝桿菌和放線菌細(xì)胞包膜
有典型的高脂肪含量。因此，當(dāng)它們被酚品紅液染料染色后，通過光學(xué)
顯微鏡觀察它們呈現(xiàn)紅色

直接定量計數(shù)法利用專門的計數(shù)池，將液體樣品壓縮成薄膜，覆蓋
在一個校準(zhǔn)的柵格里。另外，細(xì)胞也可以濃縮到一個過濾膜上。細(xì)胞或
者被事先染色(和對AFB的計數(shù)的操作相同)，或用相襯光學(xué)顯現(xiàn)。分析
人員數(shù)每個顯微鏡區(qū)域的細(xì)胞數(shù)量(通過顯微鏡觀察的圓形可見區(qū)域)，
計算每個區(qū)域的平均細(xì)胞數(shù)，然后根據(jù)預(yù)先確定的區(qū)域尺寸，計算每毫
升樣品中的細(xì)胞量。

直接計數(shù)法的優(yōu)勢在于無需因方便觀察而進(jìn)行的微生物增殖。然而
，多數(shù)直接計數(shù)法不能區(qū)分取樣時活細(xì)胞和死細(xì)胞。假設(shè)樣品體積和顯
微鏡可視表面積很小，直接計數(shù)檢測檢出限度大約是2×10的6次方細(xì)胞
／mL的樣品。直接計數(shù)工作量大，并且需要一定的專業(yè)技能。

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