落射熒光顯微鏡植物細(xì)菌細(xì)胞進(jìn)行熒光測(cè)定分析

  落射熒光顯微鏡能夠?qū)闹参锝M織回收的大量的細(xì)菌細(xì)胞進(jìn)行
熒光測(cè)定分析，廣泛用于對(duì)細(xì)菌基因表達(dá)的頻率分布進(jìn)行分析。

一種在共聚焦激光顯微鏡下對(duì)葉子上細(xì)菌GFP熒光進(jìn)行原位測(cè)定的
方法。該方法是在葉片表面上進(jìn)行熒光原位雜交，首先用多聚甲醛
固定葉片，然后用低濃度瓊脂薄膜覆蓋，以避免雜交過(guò)程對(duì)細(xì)菌細(xì)
胞空間分布的破壞。接著透過(guò)瓊脂膜用共聚焦顯微鏡觀察標(biāo)記16Sr
RNA的 E. herbicola細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞的GFP報(bào)道融合蛋白的轉(zhuǎn)錄活
性通過(guò)這種方法可以測(cè)定某一特定細(xì)菌群落中基因表達(dá)的空間分布
模式。
  熒光蛋白DsRed的發(fā)現(xiàn)引起了人們的極大關(guān)注，因?yàn)樵诨虮?br>達(dá)研究中DsRed有潛力與GFP一起形成轉(zhuǎn)錄融合而作為一種細(xì)菌的內(nèi)
在標(biāo)記來(lái)應(yīng)用。盡管有研究報(bào)告稱(chēng)在單細(xì)胞中GFP和DsRed能夠被同
時(shí)激發(fā)，但是在熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)成像中DsRed也是一個(gè)良
好的受體分子(以GFP或CFP為供體)。這些熒光蛋白質(zhì)之間的相互作
用會(huì)干擾對(duì)熒光信號(hào)的定量分析，因此，用DsRed和GFP或其變種進(jìn)
行雙重標(biāo)記的適用性還需要作進(jìn)一步研究。

(本文由上海光學(xué)儀器廠編輯整理提供, 未經(jīng)允許禁止復(fù)制http://www.sgaaa.com)