細(xì)胞光散射樣品的制備細(xì)胞儀測(cè)定檢測(cè)顯微鏡

  樣品的制備
流式細(xì)胞儀是測(cè)定一個(gè)或重復(fù)的每個(gè)顆粒流經(jīng)光路的信號(hào)。因此，
細(xì)胞必須做成單個(gè)懸浮狀態(tài)，不能聚集，且如前部分所述，也不允許有
細(xì)胞碎片存在。

  非染色細(xì)胞的光散射
一個(gè)粒子如細(xì)胞出現(xiàn)在一束光線中，立即會(huì)干擾該光束，造成該光
束入射光的重分布。該細(xì)胞所獲能量則以衍射、折射、反射等復(fù)雜的參
數(shù)形式重新發(fā)射出來(lái)。這些參數(shù)與細(xì)胞體積、表面構(gòu)象、內(nèi)部結(jié)構(gòu)成函
數(shù)關(guān)系。市售的流式細(xì)胞儀一般只測(cè)定兩個(gè)固定位置的光散射，即低角
前面約10°的光散射及90°的光散射。

一般認(rèn)為，90°位置的光散射值主要受細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)所致的光反射
和折射影響，而低角前向(10°)位置的光散射則主要代表細(xì)胞大小

流式細(xì)胞儀有一整套儀器系統(tǒng)，適用于各種特殊條件下的測(cè)試，原
理大同小異。區(qū)別僅限于激發(fā)光源，光倍增管的敏感性及配置的計(jì)算機(jī)
不同。

把低功率激光器發(fā)出的相干光(Coherentlight)以一條狹窄的光束
聚焦在流動(dòng)的細(xì)胞上，這樣可輕而易舉地提高分辨率。但要提高敏感性
則必須依賴造價(jià)昂貴的大功率激光器才能實(shí)現(xiàn)。同時(shí)大功率激光器需要
極高功率電源(如多線18W輸出功率的氬激光器，每小時(shí)耗50KW，即使普
通4W輸出功率的激光器，每小時(shí)亦耗電12KW之多)。例如小量膜受體免
疫熒光檢測(cè)，以及需要紫外激發(fā)時(shí)，均需要高功率的激發(fā)光源。氬氪激
光器效率均較低。再者，若希望儀器系統(tǒng)帶有可測(cè)寬譜帶的染料激光器
時(shí)，則需配置大功率電源，這樣，儀器本身造價(jià)也要大大增加。這里需
要補(bǔ)充的是，相對(duì)上述那些不利因素而言，如果使用PI染色法檢測(cè)脊椎
動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)DNA的含量，只需100mW的低能激光器。

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