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色譜分析關(guān)鍵技術(shù)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-04-29  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):40
核心提示:高壓液相色譜Martin 和 Synge在1941年就提出高效相色譜的設(shè)想,然而直到六十年代后期,由于各種技術(shù)的發(fā)展,高效液相色譜才付諸實(shí)現(xiàn)。這種色譜技術(shù)曾被稱為高速液相色譜(HighSpeed Liquid Chromatography)

高壓液相色譜


Martin 和 Synge在1941年就提出高效相色譜的設(shè)想,然而直到六十年代后期,由于各種技術(shù)的發(fā)展,高效液相色譜才付諸實(shí)現(xiàn)。這種色譜技術(shù)曾被稱為高速液相色譜(HighSpeed Liquid Chromatography),高壓液相色譜(High Parss-ure Lipuid Chromatography),目前使用最多的名稱是高效液相色譜(High Pe-rformance Liauid Chromatography,HPLC)。高效液相色譜已經(jīng)廣泛地應(yīng)用,成為一項(xiàng)不可缺少的技術(shù)。它的主要優(yōu)點(diǎn)是⑴分辯率高于其它色譜法;⑵速度快,十幾分鐘到幾十分鐘可完成;⑶重復(fù)性高;⑷高效相色譜柱可反復(fù)使用;⑸自動化操作,分析精,確度高。根據(jù)分離過程中溶質(zhì)分子與固定相相互作用的差別,高效液相色譜可分為四個基本類型,即液-固色譜、液-液色譜、離子交換色譜和體積排阻色譜。高效液相色譜在生物領(lǐng)域中廣泛用于下列產(chǎn)物的分離和鑒定:⑴氨基酸及其衍生物;⑵有機(jī)酸;⑶甾體化合物;⑷生物鹼;⑸抗菌素;⑹糖類;⑺卟啉;⑻核酸及其降解產(chǎn)物;⑼蛋白質(zhì)、酶和多肽;⑽脂類等。
一、分類
高效液相色譜法可分為四個基本類型:即液-固色譜法,鍵合相色譜法,離子交換色譜法及體積排阻色譜法。
(一)液-固色譜法
液-固色譜法通常稱吸附色譜法,吸附劑有活性碳,氧化鋁和硅膠,在液-固色譜法中用的載體都是硅膠。硅膠對溶質(zhì),分子的吸附能力不是平均分布在整個硅脫表面的,在硅膠表面有一些區(qū)域與溶質(zhì)分子強(qiáng)烈相互作用,這些區(qū)域?yàn)榛钚晕恢茫枘z與溶質(zhì)分子間主要作用是偶極距力氫鍵及靜電相互作用。極性越強(qiáng),而化合物在硅膠柱上的滯留時間也長。在液-固色譜中,依靠流動相溶劑分子與溶質(zhì)分子競爭固定相互活性位置, 從而使溶質(zhì)從色譜柱上洗脫下來。與硅膠表面活性位置結(jié)合力強(qiáng)的溶劑洗脫溶質(zhì)分子的能力強(qiáng),因而稱強(qiáng)溶劑,反之為弱溶劑。液─固色譜法的特點(diǎn)是適于分離色譜幾何異構(gòu)體,可用于脂溶性化合物質(zhì)如磷脂,甾體化合物,脂溶性維生素,前列腺素等。
(二)鍵合相色譜法
鍵合相色譜法是由液-液色譜法即分配色譜發(fā)展起來的。鍵合相色譜法將固定相共價結(jié)合在載體顆粒上,克服了分配色譜中由于固定相在流動中有微量溶解,及流動相通過色譜柱時的機(jī)械沖擊,固定相不斷損失,色譜柱的性質(zhì)逐漸改變等缺點(diǎn)。鍵合相色譜法可分為正常相色譜法和反相色譜法。
1.正常相色譜法
在正常相色譜法中共價結(jié)合到載體上的基團(tuán)都是極性基團(tuán),如一級氨基、氰基、二醇基、二甲氨基和二氨基等。流動相溶劑是與吸附色譜中的流動相很相似的非極性溶劑,如庚烷、已烷及異辛烷等。由于固定相是極性,因此流動溶劑的極性越強(qiáng),洗脫能力也越強(qiáng),即極性大的溶劑是強(qiáng)溶劑。固定相與流動相的這種關(guān)系正好與液-固色譜法相同,稱這種色譜法為正常相色譜法。盡管如此,正常相色譜法的分離原理主要根據(jù)化合物在固定相及流動相中分配系數(shù)的不同進(jìn)行分離,它不適于分離幾何異構(gòu)體。

 
關(guān)鍵詞: 色譜 相色譜 色譜法 液相 溶劑
 
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