高效液相色譜法

　　色譜法具有許多明顯的優(yōu)勢，可以在各種條件下獲得一對手性化合物，可以滿足分離和測量的要求。它可以進行簡單快速的定性和定量分析，也可以進行制備規(guī)模的分離和微量測量。

　　色譜法已成為最有用的光學分割方法。這些方法包括高效的液相色譜法.氣相色譜法.薄層色譜法.超臨色譜法.毛細管電泳和逆流色譜-離心分配色譜法。其中，高效液相色譜法不會因高溫而改變溶質結構，失去生物活性，柱的容量高，可以發(fā)展成實驗室和工業(yè)規(guī)模來分離映射系統(tǒng)的制備。

　　根據其原理，液相色譜法可分為以下三種類型

　　(1)手性衍生法

　　優(yōu)點:分離條件比較簡單，只需要普通的HPLC色譜分離條件可以提高檢測(紫外或熒光)的靈敏度。

　　缺點：需要高純度的衍生試劑，每對映體的衍生速率不同。

　　(2)手性流動相法

　　優(yōu)點：柱前不需要衍生，對色譜柱填料沒有特殊要求。

　　缺點：添加劑選擇不當會干擾溶質的檢測，可拆分化合物有限。

　　(3)手性固定相法

　　優(yōu)點：制備方便，適用于各種化合物的分割。

　　缺點：目前還沒有廣譜色譜固定相，需要根據樣品的結構選擇合適的手性柱。

　　結論：手固定相法仍然是目前最具優(yōu)勢的光學異構體分割方法。到目前為止，這種方法已經分為幾十種類型.在過去的100年里，成千上萬種手性化合物的對映體超過了分離手性化合物對映異構體的總和。

　　綜上所述，高效液相色譜儀和手性色譜柱廣泛應用于手性分離領域。

　　這幾年我們用的是液相和色譜柱，大大小小的問題估計也遇到了很多，

　　所以在使用液相色譜的過程中，如何處理各種問題？

　　不用擔心，研創(chuàng)手性科技總結了一些解決方案，消除了你腦中的問號！

　　Part01：壓力

　　1.常見的儀器現象

　　壓力升高.降低或不穩(wěn)定

　　原因分析

　?、賰x表管道堵塞；

　?、谛孤?流動相抽空.溶劑管濾芯堵塞；

　?、巯到y(tǒng)中有氣泡；

　　應對方法

　?、賹谋玫綑z測器進行系統(tǒng)檢查，確定堵塞部位；

　　②檢查每個接口，檢查流動相，超聲清洗或更換溶劑管濾芯；

　?、凼褂们俺暳鲃酉啵艢?。

　　2.常見的色譜柱現象

　　柱頭塌陷，反壓上升，柱效下降

　　原因分析

　?、偃绻魉龠^大，會導致高柱壓或柱壓上升過快，尤其是使用高粘度溶劑(如IPA,EtOH）；

　?、诹鲃酉嗷驑悠啡芤哼^濾不徹底，固體顆粒堵塞管道或柱頭，會造成柱壓過高；

　?、墼谥^沉淀或強烈吸附樣品中的成分，會導致柱壓升高。

　　應對方法

　　①如果柱前使用粘度高的溶劑導致柱壓升高，建議先用小流速更換以前的溶劑，待柱壓降穩(wěn)定后再進樣檢測；

　?、谟捎谥鶋簡栴}導致柱頭塌陷，無法恢復柱的性能，出現異常后可嘗試反色譜柱進行實驗；

　?、勖總€柱子都有特定的壓力范圍，請參考相應的色譜柱說明書；

　　④在更換流動相時，或將柱子剛剛連接到儀器時，逐漸增加流速；

　?、輰α鲃酉嗪蜆悠啡芤哼M行徹底過濾；

　?、迾悠奉A處理；

　?、邇x器設置保護柱壓力。

　　Part02：基線

　　1.色譜柱常見現象

　　基線漂移.基線噪音大

　　2.原因分析

　?、僦鶞刈兓?；

　?、诹鲃酉嗷旌喜痪鶆?；

　?、哿魍ǔ匚廴净驓馀荩?/p>

　?、苌V柱平衡緩慢，特別是流動相組成發(fā)生較大變化；

　?、萋┮海?/p>

　?、奚V柱污染。

　　3.應對方法

　?、倏刂茖嶒炇覝囟群椭鶞叵錅囟龋?/p>

　?、谑褂肏PLC溶劑、高純鹽及添加劑、流動相在使用前進行脫氣；使用前輕輕搖動瓶子，使流動相均勻；

　?、凼褂们扒逑戳魍ǔ?、流動相脫氣；

　?、芟扔弥械葟姸鹊娜軇_洗柱子；

　?、葑⒁鈮毫?，排除漏液的地方；

　?、抻脧娤疵撊軇?在柱使用范圍內)定期沖洗柱子。

　　Part03：峰型

　　一.峰峰的常見現象

　　1.原因分析

　　①峰前沿是由柱溫引起的；

　?、跇悠啡軇┡c流動不兼容；

　?、凵V柱前端濾網板堵塞；

　　④柱效降低；

　?、葜^塌陷。

　　2.應對方法

　?、儆袝r提高溫度可以消除前沿；

　?、谟昧鲃酉嗳芙庠黾恿鲃酉鄻O性或樣品；

　?、鄹鼡Q篩板。如果前延峰很快再次出現，注意檢查顆粒物(樣品、流動相、泵、進樣閥)的來源

　?、芙ㄗh使用保護柱沖洗色譜柱或更換色譜柱；

　?、莞鼡Q色譜柱。

　　二.峰峰型的常見現象

　　1.原因分析

　?、贅悠烦d；

　　②雜質峰干擾；

　?、酃枇u基作用；

　　④洗脫強度不夠；

　　⑤柱外體積或柱外體積過大；

　　⑥柱效降低；

　?、咧^塌陷

　　2.應對方法

　　①降低樣品采樣量或稀釋樣品濃度；

　?、诩兓瘶悠坊蛘{整流量比例，使雜質不干擾主峰；

　?、酃枇u基作用；

　?、茉谥捎萌軇┓秶鷥仍黾酉疵搹姸龋?/p>

　?、轀p少連接點間隙，盡量選擇細管；

　?、藿ㄗh使用保護柱沖洗色譜柱或更換色譜柱；

　?、吒鼡Q色譜柱。

　　三.肩峰是峰型常見現象

　　1.原因分析

　?、偕V柱或保護柱入口污染；

　?、跇悠啡軇┡c流動不兼容；

　?、鄹蓴_峰；

　?、苌V柱損壞。

　　2.應對方法

　　①用強溶劑清洗色譜柱或更換色譜柱，必要時可反沖，更換保護柱；

　　②用流動相稀釋樣品；

　?、劭赡苁菢悠分写嬖诘奈镔|與目標對象沒有分離，需要調整方法（調整流動階段或更換色譜柱）來改變選擇性，可能是通過空白溶液引入系統(tǒng)的污染物；

　?、芨鼡Q色譜柱。

　　Part04：誤進溶劑

　　1.常見現象

　　柱壓劇增，分離突然變差

　　2.原因分析

　?、偻糠笮彤a品（Y1-Y5)如果導入錯誤的溶劑(如二氯甲烷).四氫呋喃.乙酸乙酯.甲苯等)，立即破壞柱子；

　　②正相手性柱和常用流動相的保存溶液含有大比例的正己烷，而正己烷和甲醇.乙腈.水的互溶性很差，如果沒有適當的溶劑置換，柱壓也可能被破壞，因為柱子中原有的溶劑不溶于溶劑。

　　3.應對方法

　?、偃軇┮坏┱`用，恢復柱子性能的可能性很低；

　?、诹⒓赐Ｖ贡茫∠铝⒅?，先用合適的溶劑(如乙醇)更換儀器前的溶劑，然后用立柱低速沖洗(至少20倍立柱體積)更換立柱中的誤溶劑。

　　Part05：殘留效應

　　1.常見現象

　　方法再現性差

　　2.原因分析

　?、僭谄胀鲃酉嘀?，殘留物可長期穩(wěn)定保留，“老化”柱子；

　?、趯嶒灪笾逑床缓?。

　　3.應對方法

　?、俪霈F問題后可以嘗試沖洗后再使用；

　?、谟谩芭f柱”在新柱上必須確認開發(fā)方法。