熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵體系化學結(jié)構(gòu)的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當從激發(fā)態(tài)恢復基態(tài)時，發(fā)出熒光。熒光標記技術(shù)指利用熒光物質(zhì)共價結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡便等優(yōu)點，使得熒光標記物在許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛。
熒光標記物質(zhì)在蛋白的功能研究、藥物篩選等領(lǐng)域也有著廣泛的應(yīng)用。人們利用利用熒光標記的多肽來檢測目標蛋白的活性，并將其發(fā)展的高通量活性篩選方法應(yīng)用于疾病治療靶點蛋白的藥物篩選和藥物開發(fā)（例如，各種激酶、磷酸酶、肽酶等）。因此，多肽的熒光修飾，同樣是多肽合成領(lǐng)域的重要內(nèi)容。
下面是一些常用的多肽修飾熒光物質(zhì)： 下面是一些熒光物質(zhì)的激發(fā)光波長和發(fā)射光波長 1.FITC修飾 異硫氰酸熒光素（FITC）具有比較高的活性，通常來說，在固相合成過程中引入該種熒光基團相對于其他熒光素要更容易，并且反應(yīng)過程中不需要加入活化試劑。
我們公司合成的FITC修飾的多肽通常主要有兩種形式：
（1）在整條肽鏈末端接入FITC，并且在FITC之前接入一分子的Acp（6-氨基己酸），也稱烷基間隔器。反應(yīng)中FITC與肽鏈上裸露的-NH2反應(yīng)，Acp的接入提供了六個碳的直鏈空間，大大降低了反應(yīng)的空間位阻，提高了反應(yīng)效率，降低了反應(yīng)難度。其次，F(xiàn)ITC還與多肽結(jié)構(gòu)中的-SH，側(cè)鏈-NH2反應(yīng)，Acp的加入也降低了這種副反應(yīng)發(fā)生的可能。此外，多肽在酸性環(huán)境條件下切割時，在N端接入FITC的多肽需要經(jīng)歷環(huán)化作用來形成熒光素，這種過程通常都會伴隨最后一個氨基酸的切除，而烷基間隔器Acp的接入就避免了這一情況的發(fā)生。
（2）在整條肽中的某個Lys側(cè)鏈接入FITC，Lys側(cè)鏈為末端為-NH2的四碳直鏈烷基，直接起到了降低空間位阻的作用。這種修飾方式能夠靈活的在整條肽中任何位置進行FITC修飾，而不僅僅局限于末端。
我們所采用的FITC修飾多肽的兩種形式，都具有操作簡便，成功率高，容易分離純化等優(yōu)點。 2.AMC修飾 7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）是一種應(yīng)用廣泛的熒光標記試劑，例如，酶的痕量測定，酶的鑒定，激光染料的制備等多種用途，此外，C端用香豆素修飾的泛素分子也是研究蛋白質(zhì)泛素化過程的重要探針。
與其他熒光染料不同的是，AMC修飾多肽分子是從C端進行：（1）AMC與肽鏈C端第一個氨基酸反應(yīng);（2）固相合成整條肽鏈（從第二個氨基酸開始），并且保留整條肽鏈的側(cè)鏈保護基和最后一個氨基保護基；（3）液相縮合AA-AMC與全保護的肽鏈；（4）切除保護基，完成肽鏈的修飾。 國肽生物提供5(6)-FAM，F(xiàn)ITC，CY5，RhodamineB，PNA，EDNAS/dabcyl，Biotin等各種修飾的高質(zhì)量多肽。國肽生物具有成熟的熒光標記多肽技術(shù)，優(yōu)良的純化生產(chǎn)工藝，定制熒光修飾的多肽，國肽生物是值得信任的品牌。
成功案例：
序列Cy5-betaA-YNDEDPEKEKRIKELELLLMSTENELKGQQAL，CY5進行修飾。
HPLC分析： MS分析：
來源：合肥國肽生物科技
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