KinExA分子與完整細(xì)胞相互作用系統(tǒng)在CAR-T細(xì)胞治療中的應(yīng)用 點擊次數(shù)：2181 發(fā)布日期：2018-12-5 來源：本站 僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)
因多種因素的限制，自體CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品可能在應(yīng)用于患者前未必能夠進(jìn)行全部項目的檢定，所以工藝驗證非常重要。工藝研究及驗證必須結(jié)合工藝的實際情況設(shè)定相應(yīng)的驗證參數(shù)，CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品工藝研究在不斷發(fā)展，到目前為止，業(yè)界對何種工藝最好并未達(dá)成共識。因此，可以在產(chǎn)品研發(fā)過程及早期臨床試驗階段開展不同程度的工藝驗證研究，工藝驗證完成后，應(yīng)在關(guān)鍵工藝步驟設(shè)置關(guān)鍵過程控制參數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)，以提高CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)一致性。
CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制研究及檢測項目一般應(yīng)包括：細(xì)胞數(shù)量及其存活率、細(xì)胞表型、CAR陽性率檢測、生物學(xué)效力檢測，無菌檢測、支原體、熱原/內(nèi)毒素的檢測、CAR-T細(xì)胞中病毒載體拷貝數(shù)及整合的檢測等。如果能夠檢測CAR-T細(xì)胞與抗原分子的親和力，以及CAR-T細(xì)胞上抗體的表達(dá)量，無疑會提升CAR-T細(xì)胞的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
目前市面上除了KinExA技術(shù)外，沒有其他特別有效的方式檢測完整細(xì)胞與分子間的親和力，更無從判斷細(xì)胞上分子的表達(dá)量。KinExA技術(shù)可以檢測細(xì)胞與分子間的親和力，并且可以計算細(xì)胞上分子的表達(dá)量。其檢測原理如下圖，先將梯度稀釋的細(xì)胞與恒定濃度的分子共同孵育達(dá)到平衡，離心之后收集上清液（此時上清液中只存在游離的分子），再通過已提前包被過的珠子捕獲游離的分子，用熒光標(biāo)簽的抗體檢測游離分子的量，通過檢測器檢測得到相應(yīng)的數(shù)值后，利用KinExA系統(tǒng)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

下圖是國內(nèi)某知名CAR-T公司通過KinExA技術(shù)檢測CAR-T細(xì)胞與抗原分子間相互作用的結(jié)果。

結(jié)果表明，CAR-T細(xì)胞與抗原的親和力Kd為45.41pM，T細(xì)胞表面CAR的表達(dá)水平為1.368e+5，Kd與EL的95%置信區(qū)間均較窄，數(shù)據(jù)非常準(zhǔn)確可信