隨著生命科學(xué)的不斷發(fā)展,人們對實(shí)驗(yàn)動物的 質(zhì)量要求也愈來愈高,清潔級以上的實(shí)驗(yàn)動物使用 量也隨之增大。清潔級動物飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)環(huán) 境衛(wèi)生使用水也要求達(dá)到無菌狀態(tài)。當(dāng)前對實(shí)驗(yàn)動 物所需的無菌水一般采用高壓滅菌( 121℃,30 min) 和純水機(jī)制取。前者高壓消毒滅菌徹底,但耗時(shí)耗 電; 后者制水取水方便,但對其無菌效果心存憂慮, 不敢大膽采用。為此,我們對重慶頤洋企業(yè)發(fā)展有 限公司生產(chǎn)的“艾科浦”牌實(shí)驗(yàn)動物飲用純水機(jī)進(jìn)行 了無菌水的效果觀察。
1 材料和方法
1. 1 實(shí)驗(yàn)動物飲用純水機(jī) 型號 ADW-4001-M ,重慶頤洋企業(yè)發(fā)展有限公 司。產(chǎn)水量為 40 L h, 純水機(jī)放置在屏障系統(tǒng)外, 以便于維修和操作,其儲水量為 200 L 的密閉儲水 桶放置在屏障系統(tǒng)內(nèi), 純水機(jī)與 儲水桶以 PE 管穿 墻連接,儲水桶內(nèi)置浸沒式紫外燈, 紫外燈 24 h 工 作, 儲水桶下部有一出水龍頭,供屏障內(nèi)工作人員 使用。 1. 2 培養(yǎng)基 營養(yǎng)瓊脂 杭州微生物試劑有限公司, 批號 20040805。硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基,杭州微生物試 劑有限公司,批號 20050428 。肉湯培養(yǎng)基,北京奧博 星生物技術(shù)責(zé)任有限公司,批號20010318 。 1. 3 水樣的采集 [ 1 ] 以無菌操作方法進(jìn)行,將屏障內(nèi)放置的純水儲
水桶的水龍頭用酒精燈燒灼消毒后,將水龍頭打開, 放水5 min 后,用滅菌的三角瓶采集水樣,密閉備 用。 1. 4 酸化水的配制 為防止實(shí)驗(yàn)動物感染綠膿桿菌等細(xì)菌等細(xì)菌, 一般對清潔級以上的實(shí)驗(yàn)動物要求飲用酸化水。本 實(shí)驗(yàn)酸化水的配制在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。取部分水樣, 用鹽酸將其調(diào)到 pH 3。密閉備用。 1. 5 純水的無菌檢驗(yàn) 在超凈臺內(nèi)用無菌吸管分別吸取 1 mL 檢樣,接 種于肉湯培養(yǎng)基和硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基上。 37℃、48 h,進(jìn)行需氧菌和厭氧菌的檢驗(yàn)。 1. 6 細(xì)菌總數(shù)的測定[1] 無菌操作法用滅菌吸管吸取 1 mL 檢樣,注入無 菌平皿中,再傾注約 15 mL 已融化并冷卻到 45℃左 右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。立即旋搖平皿使檢樣與培養(yǎng) 基充分混勻。每個(gè)檢樣應(yīng)傾注兩個(gè)平皿。于 37℃、 24 h后取出計(jì)數(shù)。
2 結(jié)果
2. 1 無菌檢測結(jié)果 為了觀察純水機(jī)的制水效果,我們對新購買的 純水機(jī)進(jìn)行了一次性制水效果的檢測,按照純水在 儲水桶中存放時(shí)間的不同,進(jìn)行了無菌檢測。其結(jié) 果見表 1。 2. 2 存放不同時(shí)間的效果 為了觀察純水機(jī)制純水存放效果,將純水和經(jīng) 配制的酸化水取出后放置在無菌瓶中,以不同存放時(shí)間取樣,分別接種肉湯培養(yǎng)基和硫乙醇酸鹽液體 培養(yǎng)基,進(jìn)行了需氧菌和厭氧菌的檢驗(yàn),以觀察純 水,酸化水不同存放時(shí)間的無菌效果,見表 2。 3 討論與小結(jié)
從以上結(jié)果可以看出,“艾科浦”牌純水機(jī)的制 水效果能達(dá)到無菌狀態(tài)。其制水原理為: 自來水經(jīng) 過PP 纖維濾芯預(yù)處理過濾,以除去水中鐵銹、泥沙 等雜質(zhì)。再經(jīng)過高效活性碳濾芯除去水中的余氯、 有機(jī)物等。再經(jīng)過反滲透( RO)處理,此過程能濾除 水中的細(xì)菌、病毒、無機(jī)鹽類等[2 ] ,經(jīng)超濾( UF)膜終 端處理,可有效去除水中可能殘存的微粒、懸浮物和 細(xì)菌及熱源等。最后再利用波長為 254 nm 的紫外 光殺菌,使細(xì)菌完全處于紫外光的照射下,可有效殺 死細(xì)菌,使水達(dá)到無菌狀態(tài)。 從表 1結(jié)果可見,純水機(jī)一次性制純水在儲水 桶中放置了 7 d 后,仍未檢出細(xì)菌。同時(shí)我們還對 純水機(jī)每天定時(shí)制水情況進(jìn)行了 1 ～ 7 d 無菌監(jiān)測, 仍未檢出細(xì)菌,說明機(jī)制純水效果好,能達(dá)到屏障系 統(tǒng)動物飲用的無菌水的要求。
從表 2 結(jié)果可知,機(jī)制的純水和經(jīng)加酸處理的 酸化水( pH2～ 3) ,在無菌瓶中經(jīng)過長達(dá) 30 d 的追蹤 觀察,仍未檢出細(xì)菌。因此,可以認(rèn)為用純水機(jī)制的 純水是可以給屏障系統(tǒng)的動物飲用和屏障內(nèi)環(huán)境清 潔衛(wèi)生使用。這與文獻(xiàn)報(bào)道的“凈化水經(jīng)鹽酸酸化, 可達(dá)到無菌標(biāo)準(zhǔn)”一致[3] 。 在長期的使用過程,建議定期(每月一次)清洗 濾芯,每周定時(shí)監(jiān)測,以保證屏障內(nèi)實(shí)驗(yàn)動物飲用水 的質(zhì)量。