一、介紹：

VDPro PRRSV-VR或LV抗體檢測試劑盒是用ELISA來定量檢測豬藍(lán)耳病毒（美洲株或歐洲株）抗體。試劑盒是用重組PRRSV（美洲株或歐洲株）的N蛋白包被，用來檢測血清中N蛋白抗體。

通過監(jiān)測豬群中PRRSV抗體滴度，這種血清學(xué)定量檢測方法能夠提供有效地信息，用來預(yù)防和控制該疾病。

二、試驗原理：

VDPro? PRRSV-VR,PRRSV-LV抗體檢測試劑盒是通過間接ELISA檢測血清中PRRSV抗體，用重組N蛋白包被，酶標(biāo)抗體為豬抗IgG。實驗操作步驟是樣品稀釋，加樣，孵育，洗滌；再加入酶標(biāo)抗體，如果血清中含有N蛋白抗體，則抗體會與酶標(biāo)板上包被的重組N蛋白結(jié)合，酶標(biāo)抗體也會與血清中N蛋白抗體結(jié)合，加入底物后，顏色將會變深。如果血清中沒有N蛋白抗體，顏色變化會很小，或不發(fā)生變化。

三、試劑盒內(nèi)容：

1、PRRSV 重組N蛋白包被板 5塊

2、10倍洗液 200毫升

3、血清稀釋液 200毫升

4、酶結(jié)合抗體 50毫升

5、陽性血清對照 2毫升

6、陰性血清對照 2毫升

7、顯色底物 60毫升

8、終止液 30毫升

四、采樣標(biāo)準(zhǔn)

①盡可能采集新鮮血清樣品。

②采集全血，分離出血清后，將血清存放在-20度冰箱，以備使用。

③不要使用溶血或污染嚴(yán)重的樣品

④大中型豬場監(jiān)測時，每群（后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、斷奶仔豬等）采樣不少于35頭份；

五、注意事項：

1、使用之前請仔細(xì)閱讀使用說和操作明；

2、試劑盒儲存條件：4-8℃；

六、實驗前準(zhǔn)備：

1、洗液10倍稀釋：即20ml洗液，加入180ml去離子水混勻，備用。

2、TMB底物：使用前恢復(fù)到室溫，因為低溫可能導(dǎo)致不顯色。

七、樣品稀釋：

1、準(zhǔn)備好1ml樣品稀釋板或微量試管；

2、樣品按100倍稀釋，分步稀釋：即先加入90微升樣品稀釋液，再加入10微升的樣品血清，混合均勻；再取90微升樣品稀釋液，加入10微升經(jīng)過第一步稀釋的血清，混合均勻即可。（陽性對照和陰性對照不要稀釋）

★稀釋后的樣品可以同時用來檢測PRRSV(美洲株) 、 PRRSV(歐洲株)和PCV-2。

八、操作步驟

1、實驗前的準(zhǔn)備及加樣

①使用前所有試劑盒組都必須恢復(fù)到室溫（18℃-25℃），試劑應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或振蕩均勻。 ②將10洗液進(jìn)行10倍稀釋，如20毫升洗液加180毫升去離子水，即配制200毫升。 ③取出抗原反應(yīng)板，在記錄表上記錄陰陽對照，樣品的位置。

④分別在每孔加人100μl稀釋后的樣品、陽性和陰性對照，貼上封板膜，室溫（22-27℃）孵育30min。

2、洗板及加試劑

①小心揭掉封板膜，棄去各孔中液體，拍凈。每孔加滿洗液300μl，洗3次。最后在吸水紙上拍凈。

②每孔加入酶結(jié)合物100μl，置室溫孵育30分鐘。

③重復(fù)①，洗5-6次。

④每孔加入TMB底物100μl，置室溫孵育15分鐘。

3、讀數(shù)

每孔加入終止液50μl，置酶標(biāo)儀450 nm波長處測定各孔OD450值。

九、結(jié)果判定

1、試驗結(jié)果同時符合下列條件，方為有效：

陽性值≥0.5

陰性值≤0.3

2、判定標(biāo)準(zhǔn)：

SP值的計算方程式：

SP=【（樣品值-陰性值）/（陽性值-陰性值）】

SP值≥0.4 判為陽性；

SP值＜0.3 判為陰性；

0.3≤SP值＜0.4，可疑