轉(zhuǎn)基因大豆品系FG72核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）

轉(zhuǎn)基因大豆品系 FG72 核酸檢測試劑盒（一管式 PCR-熒光探針法）

◆ 產(chǎn)品說明

轉(zhuǎn)基因檢測系列可針對食品、飼料等樣品中轉(zhuǎn)基因成分的特異核酸片段進行擴增，通過實時擴增

曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于轉(zhuǎn)基因大豆品系 FG72 基因成分的檢測，檢出限為 0.1%。

◆ 產(chǎn)品組成（96 測試）

試劑 含量

A-FG72-P 20μL × 8 管× 12 排

NG -P 100μL × 3 支

PG-FG72-P 100μL × 2 支

◆ 適用儀器

ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等實時熒光 PCR 儀。

◆ 自備耗材和儀器

①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；③離心機；④渦旋混勻器；⑤金屬

浴；⑥均質(zhì)機、攪拌機或研缽等研磨器具；⑦電子天平。

◆ 注意事項

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。

1）一區(qū)：樣本制備區(qū)。

2）第二區(qū)：模板添加區(qū)。

3）第三區(qū)：擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★ 分區(qū)之間好進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。

3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。

4．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應避免反復凍融，推薦使用前離心 30

秒，并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。

5．反應結(jié)束后，擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆ 樣品處理

參照《GB/T 19495.3-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 核酸提取純化方法》或其他標準處理樣品，除了處于食物和（或）

飼料鏈起始端的農(nóng)產(chǎn)品和粗加工材料（如粉碎的產(chǎn)品），大多數(shù)工業(yè)加工的食品經(jīng)過了物理、化學及酶的處理。這

些處理會降低 DNA 的含量及純度。因此，每一方法的適用性及重復性會隨特異樣品而異，一種特定的 DNA 提取方

法的性質(zhì)特征依賴于被研究的食品種類。實驗室樣品的代表性應符合《GB/T 19495.7-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 抽樣和

制樣方法》。制備的樣本保存待用。

詳細步驟請按照標準操作或查閱食安通軟件。

★ 若使用非一次性研磨器研磨樣品，一定要徹底清洗研磨器并充分干燥后再進行下一份樣品的研磨，防止交叉污染。

◆ 實驗操作

1.模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套植物基因組 DNA 提取試劑盒，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進行）

剪下所需測試數(shù)的已含有反應液的 PCR 管，放置在室溫待解凍后，離心 30 秒后揭開封口膜，向每管反應液

中分別加入 5μL 模板，順序為 NG、待測樣品模板、PG-FG72-P。蓋好配套的 PCR 管蓋后，渦旋混勻 30s，離心 1min，

立即進行 PCR 擴增反應。

3.擴增反應（擴增及產(chǎn)物分析區(qū)）

使用熒光定量 PCR 儀，熒光基團選擇 FAM，淬滅基團選擇 TAMRA。

按下列條件設(shè)置擴增反應：

PCR 循環(huán) 熒光收集位點

95℃ 10 分鐘 1 個循環(huán) —

95℃ 15 秒

45 個循環(huán)

—

60℃ 1 分鐘 ※

4. 基線和閾值設(shè)定

基線調(diào)整取 3-15 個循環(huán)的熒光信號，閾值線應超過陰性對照擴增曲線的高點

◆ 結(jié)果判定

檢測樣品無 Ct 值或≥45，曲線為直線或輕微斜線，無“S”型擴增曲線，可報告樣品陰性，不含有 FG72 基因或

含量低于檢出限；

檢測樣品 Ct≤40，曲線呈“S”型擴增曲線，可直接報告樣品陽性，含有 FG72 基因；

檢測樣品 40＜Ct＜45，需進行一次重復實驗，若 Ct 值仍處于 40 和 45 之間且呈“S”型擴增曲線，同時各種實驗

對照結(jié)果正常，報告樣品陽性，否則報告樣品陰性。

★NG 反應為平滑直線，PG 反應為“S”型擴增曲線，此次檢測結(jié)果有效，否則無效。如重復檢測結(jié)果仍為無效，請與技術(shù)支持人

員聯(lián)系。