近日，北京協(xié)和醫(yī)院發(fā)布了新型冠狀病毒核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作流程的培訓(xùn)視頻，供其他符合條件的醫(yī)療機(jī)構(gòu)在開展新型冠狀病毒核酸檢測(cè)時(shí)參考。91儀器信息網(wǎng)特將其整理成文字版本供大家方便查看！

一、新冠核酸檢測(cè)前：個(gè)人三級(jí)防護(hù)穿戴

帶一次性帽子、佩戴醫(yī)用N95口罩、一次性防護(hù)服、一次性鞋套、一次性防水靴套、一層乳膠手套、外層一次性隔離衣、防護(hù)目鏡、第二層乳膠手套、穿戴完畢后應(yīng)盡快通過專用緩沖間或者走廊，進(jìn)入核酸提取區(qū)（專業(yè)核酸提取實(shí)驗(yàn)室）。

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產(chǎn)品名目

相關(guān)廠商

護(hù)目鏡

3M、上海阿拉丁、霍尼韋爾等

口罩

麥迪康醫(yī)療、艾邁柯思、3M、霍尼韋爾、上海阿拉丁等

手套

麥迪康醫(yī)療、艾邁柯思、北京伊諾凱等

防護(hù)服

上海阿拉丁、麥迪康醫(yī)療等

二、樣本滅活處理

新冠核酸檢測(cè)須有兩名工作人員快速通過進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行滅活實(shí)驗(yàn)操作。生物安全柜內(nèi)需配備吸水棉與消毒酒精、有條件可配備吸水臺(tái)布，對(duì)樣本溢灑時(shí)進(jìn)行緊急處理；打開二級(jí)容器，用75%酒精消毒物體表面，檢測(cè)樣本管密閉性后進(jìn)行滅活處理，滅活條件（56℃，30min，水浴等多種方式），取出酒精滅活管用酒精擦拭外表，將樣本放入到生物安全柜內(nèi)。

生物安全柜相關(guān)，點(diǎn)擊下方專場(chǎng)查看：（相關(guān)推薦： 穹頂之下 的新冠檢測(cè)—— 生物安全柜）

三、手工核酸提取（以凱杰52906為例）

操作人員進(jìn)入試劑配置區(qū)或者單獨(dú)的潔凈實(shí)驗(yàn)室。

1、試劑區(qū)準(zhǔn)備：洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA

根據(jù)說明說要求，在AW1中加入無水乙醇130mL，在AW2中加入無水乙醇160mL，計(jì)入無水乙醇后及時(shí)做好標(biāo)記，在310 g的Carrier RNA中加入310 L AVE，并顛倒混勻使Carrier RNA充分溶解，就此完成洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA配置，而后通過傳遞窗傳送到樣本處理區(qū)，或者由專人送到核酸提取實(shí)驗(yàn)室中。

2、樣本的裂解

用1.5ml的無菌EP管，移液器移取560 l AVL裂解液，加入5.6 l Carrier RNA，加入140 l的已滅活的待提取核酸的待測(cè)樣本，渦旋振蕩15s，室溫靜止10min。將上述EP管放入離心機(jī)內(nèi)瞬時(shí)離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產(chǎn)物，防止污染。裂解完成后，加入560 l無水乙醇，振蕩混勻15s，將上述EP管放入離心機(jī)內(nèi)瞬時(shí)離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產(chǎn)物，防止污染。

漩渦混合器是實(shí)驗(yàn)中必不可少的設(shè)備，點(diǎn)擊下方專場(chǎng)查看更多：

向離心柱加入裂解產(chǎn)物630 l，8000轉(zhuǎn)離心1min，若離心機(jī)在生物安全柜之外，每次使用都需進(jìn)行外表面消毒。更換新廢液收集管，要從離心機(jī)中小心取出離心柱，將上層離心柱轉(zhuǎn)移到新收集管中，繼續(xù)將剩余裂解產(chǎn)物630 l加入離心柱中，若樣本體積大于140 l時(shí)需重復(fù)此步驟，直到全部裂解產(chǎn)物都過柱離心，8000轉(zhuǎn)離心1min，小心將離心柱轉(zhuǎn)移到新的收集管中。

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取500 l AW1加入離心柱中（注意，此處加樣操作時(shí)務(wù)必將移液器吸頭接觸離心柱內(nèi)壁緩慢加樣），8000轉(zhuǎn)離心1min。小心取出離心柱，更換新的收集管。

取500 l AW2加入離心柱中，14000轉(zhuǎn)離心3min，小心取出離心柱，更換新的離心柱上端收集管，置于離心機(jī)中使用最大轉(zhuǎn)速離心1min，以確保將AW2中的殘液完全離心干凈。

取無菌1.5mlEP管收集核酸，將離心柱上端小心放入1.5mlEP管中，取40-60 l的洗脫液AVE加入到離心柱中（注意：洗脫液應(yīng)盡量全部覆蓋住離心柱膜），用EP管管蓋蓋住離心柱，使用無菌剪刀剪去原離心柱管蓋。

室溫靜止1min，將其放入離心機(jī)中8000轉(zhuǎn)離心1min，回收核酸。丟棄離心柱，EP管中即為獲取的提取核酸，做好標(biāo)記與登記。

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四、用儀器提取核酸（有條件的實(shí)驗(yàn)室）

首先按照說明說準(zhǔn)備核酸提取試劑，將200 l滅活樣本添加到核酸提取試劑中，根據(jù)核酸提取儀的設(shè)置程序上機(jī)提取核酸，等儀器操作結(jié)束，提取核酸完成，回收核酸。

有條件的實(shí)驗(yàn)室用戶可以點(diǎn)擊下方專場(chǎng)查看核酸提取儀選型指南：

五、PCR體系的配制

  以某品牌為例：

根據(jù)檢測(cè)樣本數(shù)量配制體系，將配制好的PCR體系充分混勻并離心后，將其通過傳遞窗送至樣本處理核酸加樣區(qū)，或單獨(dú)的樣本加樣實(shí)驗(yàn)室。按照每孔分裝20 L反應(yīng)體系，進(jìn)行分裝，在各孔分別加入5 L待測(cè)樣本核酸或陰陽對(duì)照物（請(qǐng)注意每次檢測(cè)器包含1個(gè)陽性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照且陰性對(duì)照需隨機(jī)分布），密封PCR管，有條件時(shí)模板加樣盡量在單獨(dú)的生物安全柜進(jìn)行。

工作人員將配好的PCR管通過傳送窗口送至PCR擴(kuò)增區(qū)，或由專人送至PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，上機(jī)檢測(cè)。

PCR儀是本次檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中必不可少的設(shè)備，點(diǎn)擊下方專場(chǎng)查看更多：

六、上機(jī)檢測(cè)及結(jié)果分析（以羅氏LC480為例）

工作人員進(jìn)入基因擴(kuò)增分析實(shí)驗(yàn)室，從傳遞窗取出PCR反應(yīng)管，上機(jī)前需混勻并離心反應(yīng)體系，按試劑盒說明說設(shè)置擴(kuò)增參數(shù)并分析判讀結(jié)果。分析結(jié)果時(shí)，嚴(yán)格閱讀說明說充分了解試劑盒靈敏度、方法學(xué)局限性等綜合判讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

為防止擴(kuò)增污染，反應(yīng)結(jié)束后的PCR擴(kuò)增管嚴(yán)禁開蓋并裝入密封帶中裝入指定的垃圾桶中。

七、檢測(cè)后的消毒處理

新冠樣本處理完成后，工作人員應(yīng)用75%的酒精消毒處理外層手套并脫下外層手套，放入生物安全柜中的生物垃圾桶中。檢測(cè)完成后，生物安全柜臺(tái)面和地面應(yīng)用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇進(jìn)行擦拭。將安全柜內(nèi)產(chǎn)生的醫(yī)療垃圾用三層垃圾袋密封，并將其放入指定垃圾桶中，垃圾袋上需標(biāo)記醫(yī)療垃圾信息。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，生物安全柜以及實(shí)驗(yàn)室均要進(jìn)行紫外燈照射消毒，時(shí)間至少30min。

實(shí)驗(yàn)操作人員，應(yīng)有他人用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇對(duì)一次性隔離衣均勻噴霧消毒處理，而后脫去隔離衣將新冠檢測(cè)醫(yī)用垃圾放入制定垃圾桶中，工作人員在離開二級(jí)實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)在緩沖區(qū)或走廊按順序摘脫個(gè)人三級(jí)防護(hù)用品，首先應(yīng)帶新的外層手套，摘掉護(hù)目鏡并置于75%乙醇中消毒，自上而下、自內(nèi)向外翻轉(zhuǎn)脫掉一次性防護(hù)服，脫去外層手套，摘除口罩、一次性帽子、脫一次性鞋套。脫掉手套，新冠病毒防護(hù)服均需進(jìn)行高壓滅菌處理。高壓前后醫(yī)療垃圾嚴(yán)格區(qū)分。

高壓滅菌器可用于相關(guān)器具的消毒，點(diǎn)擊下方專場(chǎng)查看更多：

新冠病毒相關(guān)垃圾需在120度，30min條件進(jìn)行濕熱高壓處理，以高壓試紙條變色為有效，而后作為普通醫(yī)療垃圾處理。

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