2月13日，湖北省衛(wèi)健委官網(wǎng)發(fā)布的最新疫情情況，將臨床診斷病例數(shù)納入確診病例數(shù)進(jìn)行公布。通報(bào)顯示，湖北省新增新冠肺炎病例14840例(含臨床診斷病例13332例)。

何為臨床診斷病例?又為什么會(huì)有臨床確診病例?據(jù)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院院長(zhǎng)王辰分析，現(xiàn)在對(duì)于病毒核酸的檢測(cè)能力在不斷提升，但不同的試劑之間精準(zhǔn)程度有差別，并不是所有患者都能檢測(cè)出核酸陽(yáng)性，所以有大量看著流行病學(xué)史上、接觸史上像是，臨床癥狀也像是，但是核酸未能得到確證的病人，現(xiàn)在被列為疑似病例，建議在武漢出現(xiàn)這樣的病人，應(yīng)當(dāng)可以列為臨床診斷病例，因?yàn)楹怂釋?duì)于已確診的病人陽(yáng)性率也只在30%~50%之間，因此設(shè)出臨床診斷這個(gè)檔級(jí)是非常有必要的。

為什么核酸檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陰性?不同企業(yè)的試劑檢測(cè)產(chǎn)品有何異同?今天的科技日?qǐng)?bào)也發(fā)表文章：《新冠病毒核酸檢測(cè)出現(xiàn)假陰性到底是什么影響了準(zhǔn)確率》，詳細(xì)分析了為什么核酸檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陰性?不同企業(yè)的試劑檢測(cè)產(chǎn)品有何異同?

擴(kuò)增讓新冠病毒現(xiàn)形

大多數(shù)生物體的遺傳物質(zhì)是DNA，只有少數(shù)病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，例如這次的新冠病毒。為了知道人體內(nèi)是否含有新冠病毒，需要采集人體樣本進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案(試行第五版)》，在鼻咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液、糞便等標(biāo)本中可檢測(cè)出新冠病毒的RNA。

但實(shí)際上，樣本中病毒的遺傳物質(zhì)極其微量。而且與DNA相比，RNA極易降解。問(wèn)題來(lái)了，樣本中的RNA病毒量少又不穩(wěn)定，怎樣才能逼這只妖怪“現(xiàn)形”呢?

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR技術(shù))就是“照妖鏡”。該技術(shù)能將病毒的RNA合成為DNA，然后對(duì)合成DNA進(jìn)行擴(kuò)增，再通過(guò)熒光探針檢測(cè)這些擴(kuò)增產(chǎn)物。熒光探針就像雷達(dá)一樣，一旦鎖定目標(biāo)就會(huì)發(fā)出信號(hào)。

擴(kuò)增產(chǎn)物越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。核酸檢測(cè)就是通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的累積來(lái)確定樣本中是否有病毒核酸。目前，獲批的新冠病毒核酸檢測(cè)試劑使用的均是RT-PCR技術(shù)。

中國(guó)工程院院士、清華大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程系講席教授程京接受采訪時(shí)表示，除RT-PCR這一熱循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)之外，等溫核酸序列擴(kuò)增技術(shù)(NASBA技術(shù))和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP技術(shù))等恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)也在分子診斷領(lǐng)域中扮演著重要角色。

“目前，獲批的核酸檢測(cè)試劑產(chǎn)品都是單一指標(biāo)的，即只能用于檢測(cè)新冠病毒這一種病毒。”程京坦言，對(duì)于大量疑似病人來(lái)說(shuō)，這類(lèi)檢測(cè)試劑作用有限，臨床上急需能一次性檢測(cè)多個(gè)病原體的檢測(cè)試劑產(chǎn)品。

為何核酸檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陰性?

程京在采訪中表示，這可能由多種因素導(dǎo)致?！笆紫?，試劑盒研發(fā)需要十幾種關(guān)鍵化學(xué)原材料，比如酶、合成DNA等。不同企業(yè)選擇的原材料供貨方不同，酶的活性、DNA的純度就會(huì)有差別，這都會(huì)影響到核酸檢測(cè)試劑的準(zhǔn)確度?！背叹┱f(shuō)。

“而在試劑盒產(chǎn)品研發(fā)過(guò)程中，原材料制備、生產(chǎn)工藝選擇、研發(fā)人員能力、技術(shù)手段使用，每一個(gè)環(huán)節(jié)都有可能產(chǎn)生偏差，誤差累計(jì)起來(lái)也會(huì)導(dǎo)致試劑盒產(chǎn)品靈敏度出現(xiàn)差別?！背叹┱f(shuō)。

再者，取樣過(guò)程不規(guī)范也會(huì)影響后續(xù)的分離和測(cè)定結(jié)果。以使用最普遍、操作簡(jiǎn)單的咽拭子采集為例，由于咽部的新冠病毒含量少，所以有可能造成漏檢。“雖然只是在咽部拿棉簽劃幾下，但如果沒(méi)有良好的專(zhuān)業(yè)實(shí)操技能，樣本的采集部位和手法可能不符合規(guī)范，就可能直接影響檢測(cè)結(jié)果?！背叹┍硎?，此外，剛被感染的病人因體內(nèi)帶毒數(shù)量有限，也可能出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果為陰性。

送樣本時(shí)必須采取冷鏈運(yùn)輸，如果在運(yùn)送過(guò)程中樣本受損，也會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

核酸檢測(cè)出現(xiàn)假陰性的問(wèn)題，一度引發(fā)用CT影像代替核酸檢測(cè)試劑確診新冠肺炎的呼聲。近日發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案(試行第五版)》中，在“疑似病例”和“確診病例”之外新增了一個(gè)“臨床診斷病例”，并將“疑似病例具備肺炎影像特征者”作為其診斷標(biāo)準(zhǔn)(只限于湖北省之內(nèi))，這也意味著CT影像結(jié)果成了“臨床診斷病例”的判定依據(jù)。

浙江大學(xué)附屬第二醫(yī)院放射科主任醫(yī)師、中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)放射醫(yī)師分會(huì)呼吸專(zhuān)委會(huì)主任委員張敏鳴教授曾指出，CT影像結(jié)果陽(yáng)性也存在誤診可能。他還提到，如果都去做CT檢查而忽略防護(hù)，容易造成交叉感染。專(zhuān)家表示，無(wú)論是CT檢查還是核酸檢測(cè)，都不能保證絕對(duì)的準(zhǔn)確性。

“盡管核酸檢測(cè)存在假陰性問(wèn)題，但核酸檢測(cè)是病原診斷的一個(gè)依據(jù)，也是目前確診的最重要依據(jù)?！眹?guó)家醫(yī)療專(zhuān)家組成員、北京大學(xué)第一醫(yī)院感染疾病科主任王貴強(qiáng)表示。