上海琛藝實業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司酶科品牌ELISA試劑盒研發(fā)的種屬涵蓋：人，大鼠，小鼠，豬，牛，羊，兔，植物，農(nóng)殘類，魚類等。具有完善的實驗技術開發(fā)平臺，成熟的抗原、抗體研發(fā)系統(tǒng)，熟練掌握各種酶聯(lián)技術，結合公司的研發(fā)團隊，可以有效的保證公司產(chǎn)品強的穩(wěn)定性和高的準確性，同時又具有競爭力的價格。公司目前主要提供生化試劑、分子生物學試劑及試劑盒，各種抗體及免疫學試劑盒、實驗耗材等多門類上萬種產(chǎn)品，產(chǎn)品涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域。同時需要待測服務可以隨時聯(lián)系銷售陳靜。。。。。。

名稱: 小鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA試劑盒操作步驟

英文名稱:human IgM(RhV-IgM)ELISA kit 

規(guī)格: 96T/48T

品牌:酶科

種屬:大鼠ELISA試劑盒

檢測波長:450 nm

所需樣本體積: 50-100ul

 適用范圍:僅供科研

保存及有效期:2-8℃，六個月

 檢測目的:用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。

上海琛藝供應的種屬有：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELISA試劑盒等

1.試劑盒用途

本試劑盒用于體外定量檢測待測樣品中重組胰蛋白酶含量。本試劑盒僅供研究和工業(yè)生產(chǎn)使用。

2.試劑盒基本參數(shù)

靈敏度： 1 ng/ml

檢測范圍：0.078 - 40 ng/ml

特異性：可檢測重組胰蛋白酶，與其它重組大腸菌表達系統(tǒng)相關蛋白無明顯交叉反應。

重復性：板內，板間變異系數(shù)均 10%。

工作時間：熟練實驗人員可在 2.5 小時內完成一次測定。

有效期：6 個月

3.小鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA試劑盒操作步驟-elisa試劑盒組成及保存

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1份

1份

封板膜

2片（48）

2片（96）

密封袋

1個

1個

酶標包被板

1 48

1 96

標準品

0.5ml 1瓶

0.5ml 1瓶

2-8℃保存

標準品稀釋液

1.5ml 1瓶

1.5ml 1瓶

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

終止液

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

濃縮洗滌液

（20ml 20倍） 1瓶

（20ml 30倍） 1瓶

2-8℃保存

注意事項

①儲存：試劑盒中各種試劑請按說明書提示合理存放。儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶需旋緊以防止蒸發(fā)和微生物污染，否則可能會出現(xiàn)錯誤結果。

②酶標板：剛開啟的酶標板孔中可能會有少許水樣物質，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結果造成任何影響。暫時不用板條應拆下后放入備用自封袋，按推薦溫度存放。

③加樣：加樣和加同一試劑時，第一孔與最后孔之間加樣時間間隔過大將導致不同的 預溫育 時間，從而明顯的影響到測量值的準確性及重復性，每次的加樣時間zui好控制在 10 分鐘之內，推薦設置復孔。

④溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時必須給酶標板覆膜，洗板后應盡快進行下步操作，避免酶標板處于干燥狀態(tài)。嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。

⑤洗板：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在吸水紙或干布上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水。讀數(shù)前要清除酶標板底部殘留的液體和手指印，以免影響酶標儀讀數(shù)。

⑥試劑配制：試劑盒在運輸過程中會使液體沾到管壁或瓶蓋，因此使用 1000 轉/分離心一分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前請用移液器小心吹打 4-5 次使溶液混勻。所有試劑請按說明書指示請精確配制。

⑦顯色時間的控制：加入底物后，請定時觀察反應孔的顏色變化（比如每隔五分鐘），如梯度已經(jīng)很明顯，請?zhí)崆凹咏K止液終止反應，以避免顏色過深，影響酶標儀讀數(shù)。

⑧底物：請避光保存底物。在儲存和溫育時，避免強光直接照射。

⑨混勻：充分輕微混勻對反應結果尤為重要，zui好使用微量振蕩器，使用最低頻率，如無微量振蕩器，可以在反應前手工輕輕敲擊酶標板框混勻。

提示：不同批號的試劑盒組分不能混用（洗滌液和終止液除外）。

⑩關于樣品回收率

1）本試劑盒以測定重組豬胰蛋白酶的抗原性而非活力來推測殘留量，因此試劑盒中標準品采用胰蛋白酶的消光系數(shù)（E1%1cm=13.6D, 即當 A280nm=1.36 時，胰蛋白酶濃度為 1mg/ml）來計算其蛋白含量，以最大限度保持質控的精確和穩(wěn)定性。

2）不同計量方法以及產(chǎn)品純度的差別可以導致不同來源、不同批次產(chǎn)品中胰蛋白酶的蛋白含量不完全一致，也會造成回收率的差異。

3）為避免上述因素影響，建議將用作回收率測試的樣品采用分光光度法（A280nm）估算蛋白含量，再稀釋至適合的濃度用于回收率測試，盡量減少回收率的誤差。

11.問題分析

若實驗結果有問題，請及時對顯色結果拍照，并妥善保存未使用板條及試劑，然后聯(lián)系技術支持。也可參考以下信息以找出原因。

 ELISA試劑盒實驗因其靈敏度較高、特異性較好而廣泛應用于臨床上，但操作中的各環(huán)節(jié)對檢測效果影響較大，稍不注意，就有可能導致顯色不全、花板。

問題主要集中在這幾個方面：選材、加樣、孵育、洗板、顯色、終止、讀板。問題及解決方案具體解析如下：

選材

選擇質量優(yōu)良的檢測試劑，操作前將試劑在室溫下平衡 30-60 分鐘。

加樣

出現(xiàn)問題可能原因

1. 血清或血漿標本分離不好即進行加樣。

2. 手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）。

3. 加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

解決方案

1. 標本為血清：zui好將血液先自然存放 1-2 小時后，再用 3000 rmp 離心 15 分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合 5-10 次，放置一段時間后，3000 rpm 離心 15 分鐘；若在幾天內檢測，可放在 2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于 -20℃的低溫冰箱內。

2. 加樣后及時放入孵箱。

3. 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

4. 如果采用 AT 或其他全自動加樣，zui好選擇 FAME 或其他后處理儀器加酶試劑。

5. 標本較多時，請分批操作。

孵育

出現(xiàn)問題可能原因

1. 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底。

2. 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。

解決方案

1. 貼封片或加蓋；

2. 按說明步驟嚴格控制操作時間。

洗板

出現(xiàn)問題可能原因

1. 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。

2. 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。

3. 反應板過多造成洗板等待時間長。

解決方案

1. 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后zui好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干。

2. 合理安排，或多用幾臺洗板機。

顯色

出現(xiàn)問題可能原因

1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑。

2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

解決方案

1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的 TMB 顯色劑不用。

2. 加樣時保持顯色劑不外流。

3. A、B 液應避免接觸金屬器械。

終止

出現(xiàn)問題可能原因

加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽性增加。

解決方案

加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。

讀板

出現(xiàn)問題可能原因

讀板時板底不清潔。

解決方案

應保證酶標板清潔。