斜面?zhèn)鞔２?p> 斜面?zhèn)鞔２胤椒ㄊ菍⒕N定期在新鮮瓊脂斜面培養(yǎng)基上、液體培養(yǎng)基中或穿刺培養(yǎng)，然后在低溫條件下保存。它可用于實驗室中各類微生物的保藏，此法簡單易行，且不要求任何特殊的設(shè)備。但此方法易發(fā)生培養(yǎng)基干枯、菌體自溶、基因突變、菌種退化、菌株污染等不良現(xiàn)象。因此要求在基本培養(yǎng)基上傳代，目的是能淘汰突變株，同時轉(zhuǎn)接菌量應(yīng)保持較低水平。斜面培養(yǎng)物應(yīng)在密閉容器中于5℃保藏，以防止培養(yǎng)基脫水并降低代謝活性。此方法一般不適宜作工業(yè)生產(chǎn)菌種的長期保藏，一般保存時間為3~6個月。如放線菌于4~6℃保存，每3個月移接一次；酵母菌于4~6℃保存，每4~6個月移接一次；霉菌于4~6℃保存，每6個月移接一次。

真空凍干保藏

真空冷凍干燥的基本方法是先將菌種培養(yǎng)到大穩(wěn)定期后，一般培養(yǎng)放線菌和絲狀真菌約需7~10天，培養(yǎng)細菌約需24~28小時，培養(yǎng)酵母約需3天。然后混懸于含有保護劑的溶液中，保護劑常選用脫脂乳、蔗糖、動物血清、谷氨酸鈉等，菌液濃度為109~1019個/ml，取0.1~0.2ml菌懸液置于安瓿管中冷凍，再于減壓條件下使凍結(jié)的細胞懸液中的水分升華至1%~5%，使培養(yǎng)物干燥。后將管口熔封，保存在常溫下或冰箱中。此法是微生物菌種長期保藏的為有效的方法之一，大部分微生物菌種可以在凍干狀態(tài)下保藏10年之久而不喪失活力。而且經(jīng)凍干后的菌株無需進行冷凍保藏，便于運輸。但操作過程復(fù)雜，并要求一定的設(shè)備條件。

礦物油中浸沒保藏

此方法簡便有效，可用于絲狀真菌、酵母、細菌和放線菌的保藏。特別對難于冷凍干燥的絲狀真菌和難以在固體培養(yǎng)基上形成孢子的擔(dān)子菌等的保藏更為有效。是將瓊脂斜面或液體培養(yǎng)物或穿刺培養(yǎng)物浸入礦物油中于室溫下或冰箱中保藏，操作要點是首先讓待保藏菌種在適宜的培養(yǎng)基上生長，然后注入經(jīng)160℃干熱滅菌1~2h或濕熱滅菌后120℃烘去水分的礦物油，礦物油的用量以高出培養(yǎng)物1cm為宜，并以橡皮塞代替棉塞封口，這樣可使菌種保藏時間延長至1~2年。以液體石蠟作為保藏方法時，應(yīng)對需保藏的菌株預(yù)先作試驗，因為某些菌株如酵母、霉菌、細菌等能利用石蠟為碳源，還有些菌株對液體石蠟保藏敏感。所有這些菌株都不能用液體石蠟保藏，為了預(yù)防不測，一般保藏菌株 2~3年也應(yīng)做一次存活試驗。

干燥-載體保藏

此法適用于產(chǎn)孢子或芽孢的微生物的保藏。是將菌種接種于適當(dāng)?shù)妮d體上，如河砂、土壤、硅膠、濾紙及麩皮等，以保藏菌種。以沙土保藏用得較多，制備方法為：將河砂經(jīng)24目過篩后用10%~20%鹽酸浸泡3~4 h，以除去其中所含的有機物，用水漂洗至中性，烘干，然后裝入高度約1cm的河沙于小試管中，121℃間歇滅菌3次。用無菌吸管將孢子懸液滴入砂粒小管中，經(jīng)真空干燥8 h，于常溫或低溫下保藏均可，保存期為1~10年。土壤法以土壤代替砂粒，不需酸洗，經(jīng)風(fēng)干、粉碎，然后同法過篩、滅菌即可。一般細菌芽孢常用砂管保藏，霉菌的孢子多用麩皮管保藏。

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