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接頭 DNA(pSma I)5nmol實(shí)驗(yàn)步驟詳細(xì)介紹：

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
接頭 DNA(pSma I)5nmol實(shí)驗(yàn)步驟本產(chǎn)品是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細(xì)胞，適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株，用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107CFU/ g。 DH10Bac 細(xì)胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個(gè) mini-F 復(fù)制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點(diǎn)和 lac Z -互補(bǔ)因子。輔助質(zhì)粒包含 tns ABCD 區(qū)域，該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質(zhì)粒插入親本 Bacmid 靶位點(diǎn)所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。供體如 pFastBac 系列質(zhì)粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂，Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲病毒多角體基因啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號(hào)。當(dāng)含有靶基因 pFastBac 的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到 DH10Bac 細(xì)胞后，發(fā)生重組后就可產(chǎn)生重組 Bacmid，提取純化重組 Bacmid 轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產(chǎn)生昆蟲病毒。此外，DH10Bac 細(xì)胞中的 The 80dlacZDM15 基因的產(chǎn)物可以實(shí)現(xiàn) -半乳糖苷酶的 -互補(bǔ)現(xiàn)象，用于重組 bacmid 的藍(lán)白斑篩選。菌株基因型為：F- mcrA (mrrhsdRMSmcrBC) 80lacZ M15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara,leu)7697 galU galK - rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
接頭 DNA(pSma I)5nmol實(shí)驗(yàn)步驟規(guī)格及成分：

接頭 DNA(pSma I)5nmol實(shí)驗(yàn)步驟使用方法：
1. 制備含有如下抗生素的 LB 固體平板：50 g/mL Kanamycin，7 g/mL gentamicin，10 g/mL tetracycline，100 g/mL X-gal，40 g/mL IPTG。
2. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 L，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以 100 L 感受態(tài)細(xì)胞為例。
3. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入 1-10 ng 重組質(zhì)粒，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個(gè)離心管中加入 900 L 無(wú)菌的 SOC（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 搖床， 200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時(shí)。
6. 用 SOC 培養(yǎng)基進(jìn)行 10 倍梯度稀釋，如分成 3 個(gè)稀釋梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 L 的各個(gè)梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體完全吸收后，倒置平板， 37℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，視平板上菌落生長(zhǎng)情況決定去留。

C127 小鼠細(xì)胞

CL-0415PLC/PRF/5(人肝癌亞力山大細(xì)胞)5 106cells/瓶 2

5. 口腔細(xì)胞系統(tǒng)

人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;HuT 78 大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0923

CD160 Others Human 人 CD160 人細(xì)胞裂解 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte

人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞( Hac) (1 106 )

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細(xì)胞系

人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;UACC812 大鼠腎系膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL

Lewis 小鼠肺癌細(xì)胞

FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人細(xì)胞裂解 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

FCGRT B2M Others Mouse 小鼠 FCGRT B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞

大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL

LLC-PK1豬腎近曲小管上皮細(xì)胞 LLC-PK1 porcine kidney proximal tubular epithelial cells M199+3% FBS/DMEM+F12+12%FBS

IFNB1 Protein Mouse 重組小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Interferon beta 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MDA-MB-468-06(人癌細(xì)胞) 5 106cells/瓶 2 Y1(腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞)

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞

FCGRT B2M Others Mouse 小鼠 FCGRT B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL

LLC-PK1豬腎近曲小管上皮細(xì)胞 LLC-PK1 porcine kidney proximal tubular epithelial cells M199+3% FBS/DMEM+F12+12%FBS

IFNB1 Protein Mouse 重組小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Interferon beta 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MDA-MB-468-06(人癌細(xì)胞) 5 106cells/瓶 2 Y1(腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞)

40%UreaWater

放線菌培養(yǎng)基(改良高氏1號(hào)) 250g 用于放線菌的分離培養(yǎng)

慶大霉素瓊脂 Gentamycin Agar 250 用于霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng)

incubationmedia

GNEnrichmentBroth

營(yíng)養(yǎng)鹽瓊脂250g用于檢測(cè)紡織品的抗真菌活性

改良BPLS瓊脂 250(g) incubation media 改良BPLS瓊脂 250(g)

3.5% NaC1甘露醇發(fā)酵管 3.5% NaC1甘露醇發(fā)酵管 20支 BR

甘露醇高鹽瓊脂250用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)incubationmedia甘露醇高鹽瓊脂250用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)

Cephalosporinstrip

Skirrow瓊脂28385250g用于空腸彎曲菌的選擇分離培養(yǎng)(GB、ISO)，每基礎(chǔ)培養(yǎng)基需添加2支配套試劑。(SR0330)

1201-prf PM-prf 周邊細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml incubation media 1201-prf PM-prf 周邊細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml

平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA) 300ml/袋*10 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)瓊脂，含糖，用于細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))

糞腸球菌瓊脂250g用于糞腸球菌的選擇性分離

Hottinger sAgar

接頭 DNA(pSma I)5nmol實(shí)驗(yàn)步驟BoltomBroth

念珠菌顯色培養(yǎng)基 Candida Chromogenic Medium 用于念珠菌分離和鑒定，白色念珠菌顯綠色

改良緩沖蛋白胨水(MBP) Modified Buffered Peptone Water 250 用于單增李氏菌前增菌培養(yǎng)

3%鈉三糖鐵瓊脂250g/瓶副溶血性弧菌生化試驗(yàn)incubationmedia3%鈉三糖鐵瓊脂250g/瓶副溶血性弧菌生化試驗(yàn)

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(含小倒管) 10ml*20支/包 用于大腸菌、大腸桿菌的測(cè)定